মূল পার্থক্য - উত্তর বনাম দক্ষিণ বনাম পশ্চিম ব্লটিং
ডিএনএ, আরএনএ এবং প্রোটিনের নির্দিষ্ট অনুক্রমের সনাক্তকরণ আণবিক জীববিজ্ঞানের বিভিন্ন ধরণের গবেষণার জন্য অপরিহার্য। জেল ইলেক্ট্রোফোরেসিস একটি কৌশল যা ডিএনএ, আরএনএ এবং প্রোটিনকে তাদের আকার অনুযায়ী আলাদা করে। জেল প্রোফাইল থেকে, বিশেষ ডিএনএ সিকোয়েন্স, আরএনএ সিকোয়েন্স বা প্রোটিনকে লেবেলযুক্ত প্রোবের সাথে ব্লটিং এবং হাইব্রিডাইজেশন নামে বিশেষ কৌশল দ্বারা সনাক্ত করা হয়। দক্ষিণ, উত্তর এবং পশ্চিম নামে তিনটি ভিন্ন ধরণের ব্লটিং পদ্ধতি রয়েছে। উত্তর দক্ষিণ এবং পশ্চিম ব্লটিং এর মধ্যে মূল পার্থক্যটি একটি নমুনা থেকে সনাক্ত করা অণুর প্রকারের সাথে নিহিত।সাউদার্ন ব্লটিং হল একটি পদ্ধতি যা একটি ডিএনএ নমুনা থেকে একটি নির্দিষ্ট ডিএনএ ক্রম সনাক্ত করে। উত্তর ব্লটিং হল একটি কৌশল যা একটি RNA নমুনা থেকে একটি নির্দিষ্ট RNA ক্রম সনাক্ত করে। ওয়েস্টার্ন ব্লটিং এমন একটি পদ্ধতি যা প্রোটিনের নমুনা থেকে একটি নির্দিষ্ট প্রোটিন সনাক্ত করে।
সাউদার্ন ব্লটিং কি?
দক্ষিণ ব্লটিং কৌশলটি ডিএনএ নমুনা থেকে একটি নির্দিষ্ট ডিএনএ ক্রম সনাক্তকরণের জন্য 1975 সালে ই.এম. সাউদার্ন দ্বারা তৈরি করা হয়েছিল। এটি আণবিক জীববিজ্ঞানে প্রবর্তিত প্রথম ব্লটিং কৌশল। এটি ডিএনএ থেকে নির্দিষ্ট জিন, ডিএনএ থেকে নির্দিষ্ট টুকরো ইত্যাদি সনাক্ত করতে সক্ষম করে। দক্ষিণী ব্লটিং কৌশলে বেশ কয়েকটি ধাপ জড়িত। সেগুলি নিম্নরূপ।
- DNA নমুনা থেকে বিচ্ছিন্ন করা হয় এবং সীমাবদ্ধ এন্ডোনিউক্লিজের সাথে পরিপাক হয়।
- অ্যাগারোজ জেল ইলেক্ট্রোফোরেসিস দ্বারা পরিপাক নমুনা আলাদা করা হয়।
- জেলের ডিএনএ খণ্ডগুলি একটি ক্ষারীয় দ্রবণ ব্যবহার করে একক স্ট্র্যান্ডে বিকৃত হয়৷
- একক আটকে থাকা ডিএনএ কৈশিক স্থানান্তরের মাধ্যমে একটি নাইট্রোসেলুলোজ ফিল্টার মেমব্রেনে স্থানান্তরিত হয়।
- স্থানান্তরিত ডিএনএ ঝিল্লিতে স্থায়ীভাবে স্থির করা হয়।
- ঝিল্লিতে স্থির ডিএনএ লেবেলযুক্ত প্রোবের সাথে হাইব্রিডাইজ করা হয়।
- আনবাউন্ড ডিএনএ ঝিল্লি থেকে ধুয়ে ফেলা হয়।
- এক্স-রে ফিল্মটি ঝিল্লির সংস্পর্শে আসে এবং একটি অটোরেডিওগ্রাফ প্রস্তুত করা হয়।
আণবিক জীববিজ্ঞানের বিভিন্ন দিকের জন্য সাউদার্ন ব্লটিং প্রয়োগ করা হয়। এটি আরএফএলপি ম্যাপিং, ফরেনসিক স্টাডিজ, জিন এক্সপ্রেশনে ডিএনএ মিথিলেশন, জেনেটিক ডিসঅর্ডারে মিউটেটেড জিন সনাক্তকরণ, ডিএনএ ফিঙ্গারপ্রিন্টিং ইত্যাদিতে কার্যকর।
চিত্র ০১: সাউদার্ন ব্লটিং টেকনিক
নর্দান ব্লটিং কি?
নর্দার্ন ব্লটিং হল একটি পদ্ধতি যা জিনের অভিব্যক্তি অধ্যয়নের জন্য একটি নমুনা থেকে একটি নির্দিষ্ট আরএনএ সিকোয়েন্স বা এমআরএনএ সিকোয়েন্স সনাক্ত করার জন্য ডিজাইন করা হয়েছে। এই কৌশলটি 1979 সালে অ্যালওয়াইন, কেম্প এবং স্টার্ক দ্বারা বিকশিত হয়েছিল। বেশ কয়েকটি ধাপের কারণে এটি দক্ষিণাঞ্চলীয় এবং পশ্চিমাঞ্চলীয় ব্লটিং কৌশল থেকে পৃথক। যাইহোক, এই কৌশলটি জেল ইলেক্ট্রোফোরেসিস, ব্লটিং এবং নির্দিষ্ট লেবেলযুক্ত প্রোব এবং সনাক্তকরণের সাথে হাইব্রিডাইজেশনের মাধ্যমেও সঞ্চালিত হয়। উত্তর ব্লটিং কৌশল নিম্নরূপ সঞ্চালিত হয়।
- RNA নমুনা থেকে বের করা হয় এবং জেল ইলেক্ট্রোফোরেসিস দ্বারা আলাদা করা হয়।
- RNA জেল থেকে ব্লটিং মেমব্রেনে স্থানান্তরিত হয় এবং স্থির হয়।
- মেমব্রেনটিকে সিডিএনএ বা আরএনএ থেকে প্রস্তুত একটি লেবেলযুক্ত প্রোব দিয়ে চিকিত্সা করা হয় (প্রোবটি নমুনার একটি নির্দিষ্ট ক্রমের পরিপূরক)।
- প্রোবটি একটি নির্দিষ্ট অনুক্রমের সাথে আবদ্ধ করার জন্য ঝিল্লির সাথে ইনকিউব করা হয়।
- আনবাউন্ড প্রোবগুলি ধুয়ে ফেলা হয়েছে৷
- হাইব্রিডাইজড টুকরো একটি অটোরেডিওগ্রাফ দ্বারা সনাক্ত করা হয়৷
নর্দার্ন ব্লটিং হল হাইব্রিডাইজড এমআরএনএ সনাক্তকরণ এবং পরিমাণ নির্ধারণ, আরএনএ অবক্ষয় অধ্যয়ন, আরএনএ অর্ধ-জীবনের মূল্যায়ন, আরএনএ স্প্লিসিং সনাক্তকরণ, জিনের অভিব্যক্তি অধ্যয়ন ইত্যাদির একটি গুরুত্বপূর্ণ হাতিয়ার।
চিত্র 02: নর্দার্ন ব্লটিং
ওয়েস্টার্ন ব্লটিং কি?
ওয়েস্টার্ন ব্লটিং হল লেবেলযুক্ত অ্যান্টিবডি ব্যবহার করে প্রোটিন মিশ্রণ থেকে একটি নির্দিষ্ট প্রোটিন সনাক্ত করার একটি পদ্ধতি। অতএব, ওয়েস্টার্ন ব্লট একটি ইমিউনোব্লট হিসাবেও পরিচিত। এই কৌশলটি 1979 সালে Towbin et al দ্বারা চালু করা হয়েছিল এবং এটি এখন নিয়মিতভাবে প্রোটিন বিশ্লেষণের জন্য ল্যাবে সঞ্চালিত হয়। ধাপগুলো নিম্নরূপ।
- নমুনা থেকে প্রোটিন বের করা হয়
- পলিঅ্যাক্রিলামাইড জেল ইলেক্ট্রোফোরেসিস ব্যবহার করে প্রোটিনগুলি তাদের আকার দ্বারা পৃথক করা হয়
- বিচ্ছিন্ন অণুগুলি ইলেক্ট্রোপোরেশনের মাধ্যমে একটি PVDF ঝিল্লি বা নাইট্রোসেলুলোজ ঝিল্লিতে স্থানান্তরিত হয়
- অ্যান্টিবডিগুলির সাথে অনির্দিষ্ট আবদ্ধতার জন্য ঝিল্লিটি ব্লক করা হয়েছে
- স্থানান্তরিত প্রোটিন প্রাথমিক অ্যান্টিবডির সাথে আবদ্ধ থাকে (এনজাইম লেবেলযুক্ত অ্যান্টিবডি)।
- অনির্দিষ্টভাবে আবদ্ধ প্রাথমিক অ্যান্টিবডি অপসারণের জন্য ঝিল্লিটি ধুয়ে ফেলা হয়
- বাউন্ড অ্যান্টিবডিগুলি একটি সাবস্ট্রেট যুক্ত করে এবং গঠিত রঙিন অবক্ষেপ সনাক্ত করে সনাক্ত করা হয়
পশ্চিমী ব্লটিং মানুষের সিরাম নমুনায় এইচআইভি-বিরোধী অ্যান্টিবডি সনাক্তকরণে কার্যকর। ওয়েস্টার্ন ব্লট হেপাটাইটিস বি সংক্রমণের নিশ্চিতকরণ পরীক্ষা এবং পাগল গরুর রোগের জন্য নিশ্চিত পরীক্ষা হিসেবেও ব্যবহার করা যেতে পারে।
চিত্র 03: ওয়েস্টার্ন ব্লটিং
নর্দার্ন সাউদার্ন এবং ওয়েস্টার্ন ব্লটিং এর মধ্যে পার্থক্য কি?
উত্তর বনাম দক্ষিণ বনাম ওয়েস্টার্ন ব্লটিং |
|
| অণুর প্রকার সনাক্ত করা হয়েছে | |
| নর্দান ব্লটিং | নর্দার্ন ব্লটিং একটি আরএনএ নমুনা থেকে একটি নির্দিষ্ট আরএনএ সিকোয়েন্স সনাক্ত করে৷ |
| দক্ষিণ ব্লটিং | দক্ষিণ ব্লটিং একটি ডিএনএ নমুনা থেকে একটি নির্দিষ্ট ডিএনএ ক্রম সনাক্ত করে৷ |
| ওয়েস্টার্ন ব্লটিং | ওয়েস্টার্ন ব্লটিং প্রোটিন নমুনা থেকে একটি নির্দিষ্ট প্রোটিন সনাক্ত করে৷ |
| জেলের প্রকার | |
| নর্দান ব্লটিং | এটি অ্যাগারোজ/ফরমালডিহাইড জেল ব্যবহার করে। |
| দক্ষিণ ব্লটিং | এটি অ্যাগারোজ জেল ব্যবহার করে। |
| ওয়েস্টার্ন ব্লটিং | এতে Polyacrylamide জেল ব্যবহার করা হয়। |
| ব্লটিং পদ্ধতি | |
| নর্দান ব্লটিং | এটি একটি কৈশিক স্থানান্তর। |
| দক্ষিণ ব্লটিং | এটি একটি কৈশিক স্থানান্তর। |
| ওয়েস্টার্ন ব্লটিং | এটি একটি বৈদ্যুতিক স্থানান্তর। |
| প্রোব ব্যবহার করা হয়েছে | |
| নর্দান ব্লটিং | cDNA বা RNA প্রোবগুলিকে তেজস্ক্রিয় বা অ-তেজস্ক্রিয়ভাবে লেবেল করা হয়েছে৷ |
| দক্ষিণ ব্লটিং | DNA প্রোবগুলিকে তেজস্ক্রিয়ভাবে বা অ-তেজস্ক্রিয়ভাবে লেবেল করা হয়৷ |
| ওয়েস্টার্ন ব্লটিং | প্রাথমিক অ্যান্টিবডিগুলি প্রোব হিসাবে ব্যবহৃত হয়৷ |
| ডিটেকশন সিস্টেম | |
| নর্দান ব্লটিং | এটি একটি অটোরেডিওগ্রাফ বা আলো বা রঙের পরিবর্তন সনাক্তকরণ ব্যবহার করে করা হয়। |
| দক্ষিণ ব্লটিং | এটি একটি অটোরেডিওগ্রাফ ব্যবহার করে করা হয়, আলো বা রঙের পরিবর্তন সনাক্তকরণ। |
| ওয়েস্টার্ন ব্লটিং | এটি আলো বা রঙের পরিবর্তন সনাক্তকরণ ব্যবহার করে করা হয়। |
সারাংশ – উত্তর বনাম দক্ষিণ বনাম ওয়েস্টার্ন ব্লটিং
ব্লটিং একটি বিশেষ কৌশল যা নমুনা থেকে নির্দিষ্ট ডিএনএ, আরএনএ বা প্রোটিন সনাক্তকরণের জন্য তৈরি করা হয়েছে।একটি নির্দিষ্ট ধরণের অণু সনাক্ত করার জন্য উত্তর, দক্ষিণ এবং পশ্চিম নামে তিনটি পৃথক ব্লটিং পদ্ধতি রয়েছে। উত্তর ব্লটিং কৌশলটি আরএনএর মিশ্রণ থেকে একটি নির্দিষ্ট আরএনএ ক্রম সনাক্ত করার জন্য ডিজাইন করা হয়েছে। সাউদার্ন ব্লটিং টেকনিক একটি ডিএনএ নমুনা থেকে একটি নির্দিষ্ট ডিএনএ সিকোয়েন্স সনাক্ত করতে সক্ষম করে এবং একটি প্রোটিন মিশ্রণ থেকে একটি নির্দিষ্ট প্রোটিন সনাক্ত করার জন্য পশ্চিমা ব্লটিং কৌশল তৈরি করা হয়৷
