মূল পার্থক্য – নাইট্রোসেলুলোজ বনাম PVDF
ওয়েস্টার্ন ব্লটিং এমন একটি পদ্ধতি যা প্রোটিন নমুনা থেকে নির্দিষ্ট প্রোটিন সনাক্তকরণ এবং পরিমাণ নির্ধারণের অনুমতি দেয়। কৌশলটির নির্ভরযোগ্যতা জেল থেকে প্রোটিন শোষণের জন্য একটি সঠিক ঝিল্লি নির্বাচনের উপর নির্ভর করে। বিভিন্ন ধরণের মাইক্রোপোরাস মেমব্রেন রয়েছে। নাইট্রোসেলুলোজ এবং পিভিডিএফ ঝিল্লি হল এমন দুটি ঝিল্লি যা গবেষকরা অন্যান্য ধরণের ঝিল্লির তুলনায় তাদের বিশেষ বৈশিষ্ট্যের কারণে পছন্দ করেন। নাইট্রোসেলুলোজ বা পিভিডিএফ-এর মধ্যে নির্বাচন পশ্চিমা ব্লটিংয়ে আরেকটি চ্যালেঞ্জ। নাইট্রোসেলুলোজ এবং পিভিডিএফ উভয়েরই উচ্চ প্রোটিন শোষণ ক্ষমতা রয়েছে।নাইট্রোসেলুলোজ এবং পিভিডিএফ ঝিল্লির মধ্যে মূল পার্থক্য হল যে নাইট্রোসেলুলোজ ঝিল্লির অ্যান্টিবডি ছিঁড়ে ফেলার ক্ষমতা নেই এবং অ্যান্টিবডি রিপ্রোবিংয়ের জন্য ঝিল্লি পুনরায় ব্যবহার করার ক্ষমতা নেই যখন পিভিডিএফ ঝিল্লির স্ট্রিপিং এবং পুনঃব্যবহারের ক্ষমতা রয়েছে৷
নাইট্রোসেলুলোজ কি?
নাইট্রোসেলুলোজ হল একটি পলিমার যা নাইট্রিক অ্যাসিড দিয়ে সেলুলোজের চিকিত্সা করে তৈরি করা হয় এবং আণবিক জীববিজ্ঞানে মাইক্রোপোরাস মেমব্রেন তৈরি করতে ব্যবহৃত হয়, বিশেষত দক্ষিণ, উত্তর এবং পশ্চিম ব্লটিং এর মতো ব্লটিং কৌশলগুলির জন্য। নাইট্রোসেলুলোজ ঝিল্লির ছিদ্রের আকার 3 থেকে 20 µm পর্যন্ত। নাইট্রোসেলুলোজ মাইক্রোপোরাস মেমব্রেন ঝিল্লির পৃষ্ঠে ঘটমান ইমিউনোকেমিক্যাল প্রতিক্রিয়া সনাক্ত করতে সহায়তা করে। অতএব, নাইট্রোসেলুলোজ ঝিল্লি প্রায়শই প্রোটিনের অচলাবস্থা এবং ওয়েস্টার্ন ব্লটিং-এ নির্দিষ্ট প্রোটিন সনাক্তকরণের জন্য ব্যবহৃত হয়। নাইট্রোসেলুলোজ ঝিল্লি গ্লাইকোপ্রোটিন এবং নিউক্লিক অ্যাসিডকেও স্থির করতে পারে।
নাইট্রোসেলুলোজ ঝিল্লি বেশ কয়েকটি বৈশিষ্ট্যের কারণে পার্শ্বীয় প্রবাহ পরীক্ষায় পছন্দ করা হয়।নাইট্রোসেলুলোজ ঝিল্লি উচ্চ ঘনত্বে প্রোটিন শোষণ করে। ঝিল্লি ভেজাতে ব্যবহৃত দ্রাবক নাইট্রোসেলুলোজ ঝিল্লির প্রোটিন শোষণকে হ্রাস করে না। নাইট্রোসেলুলোজ ঝিল্লি সহজেই পছন্দসই জেল আকারে কাটা যায় এবং বৈদ্যুতিক বা কৈশিক স্থানান্তরের মাধ্যমে জেল থেকে ঝিল্লিতে প্রোটিন স্থানান্তর করা যায়। নাইট্রোসেলুলোজ উচ্চ বাঁধাই সম্ভাবনা সহ ঝিল্লির মাধ্যমে প্রোটিনের দ্রুত প্রবাহের অনুমতি দেয়। নাইট্রোসেলুলোজ পরিচালনার একটি উন্নত শক্তি দেখায়। নাইট্রোসেলুলোজ মেমব্রেনের আরেকটি বিশেষ গুণ হল এটিকে অদ্রাবক জল প্রতিরোধী আঠালো দিয়ে সহজেই বিভিন্ন প্লাস্টিকের ব্যাকিংয়ে আঠালো করা যায়।
চিত্র 01: ওয়েস্টার্ন ব্লটিং এর জন্য নাইট্রোসেলুলোজ ঝিল্লি
PVDF কি?
Polyvinylidene difluoride (PVDF) হল ফ্লুরোপলিমার যা vinylidene difluoride এর পলিমারাইজেশন দ্বারা উত্পাদিত হয় এবং এতে প্রোটিনের উচ্চ স্থিরতা ক্ষমতা রয়েছে।অতএব, PVDF থেকে তৈরি মাইক্রোপোরাস মেমব্রেনগুলি প্রোটিনের মিশ্রণ থেকে নির্দিষ্ট প্রোটিন বিশ্লেষণ করতে পশ্চিমা ব্লটিং কৌশলগুলিতে ব্যবহৃত হয়। PVDF ঝিল্লি অ্যামিনো অ্যাসিড বিশ্লেষণ এবং প্রোটিন সিকোয়েন্সিংয়ের জন্যও ব্যবহার করা যেতে পারে। নাইট্রোসেলুলোজ ঝিল্লির উপর PVDF ঝিল্লির সবচেয়ে গুরুত্বপূর্ণ বৈশিষ্ট্য হল যে এটি সহজেই অ্যান্টিবডিগুলিকে ছিনিয়ে নেওয়া যায় এবং পরবর্তী অ্যান্টিবডি প্রোবের জন্য পুনরায় ব্যবহার করা যায়৷
PVDF ঝিল্লি নাইট্রোসেলুলোজ ঝিল্লির চেয়ে ঘন; অতএব, পুনঃব্যবহারের সময় ক্ষতির জন্য আরও প্রতিরোধী। PVDF ঝিল্লি অত্যন্ত হাইড্রোফোবিক। তাই ব্যবহারের আগে অবশ্যই মিথানল বা আইসোপ্রোপ্যানলে ভিজিয়ে রাখতে হবে।
নাইট্রোসেলুলোজ এবং পিভিডিএফ-এর মধ্যে পার্থক্য কী?
নাইট্রোসেলুলোজ বনাম PVDF |
|
| নাইট্রোসেলুলোজ হল সেলুলোজ দিয়ে গঠিত পলিমার। | PVDF হল একটি ফ্লুরোপলিমার যা vinylidene difluoride এর পলিমারাইজেশন দ্বারা উত্পাদিত হয়৷ |
| ঝিল্লির ছিদ্রের আকার | |
| সাধারণত ছিদ্রের আকার 0.1, 0.2 বা 0.45μ | সাধারণত ছিদ্রের আকার 0.1, 0.2 বা 0.45μm |
| প্রোটিন বাঁধাই ক্ষমতা | |
| নাইট্রোসেলুলোজের প্রোটিন বাঁধাই ক্ষমতা 80 থেকে 100 μg/cm2। | PVDF এর প্রোটিন বাঁধাই ক্ষমতা 170 থেকে 200 μg/cm2। |
| সংবেদনশীলতা | |
| PVDF এর তুলনায় এর সংবেদনশীলতা কম। | এটির একটি উচ্চ সংবেদনশীলতা রয়েছে৷ |
| কম প্রকাশ করা প্রোটিন সনাক্তকরণ | |
| যেহেতু নাইট্রোসেলুলোজ ঝিল্লিতে সংবেদনশীলতা কম, তাই এটি কম প্রকাশ করা প্রোটিন সনাক্তকরণের জন্য উপযুক্ত নয়। | এটি উচ্চ সংবেদনশীলতার কারণে কম প্রকাশ করা প্রোটিন সনাক্তকরণের জন্য আরও উপযুক্ত৷ |
| ব্যাকগ্রাউন্ড নয়েজ | |
| এতে কম ব্যাকগ্রাউন্ড নয়েজ আছে | এটির ব্যাকগ্রাউন্ডের শব্দ বেশি। |
| প্রোটিনের সাথে মিথস্ক্রিয়া | |
| প্রোটিন অণু হাইড্রোফোবিক মিথস্ক্রিয়া দ্বারা নাইট্রোসেলুলোজ ঝিল্লির সাথে আবদ্ধ হয়। | হাইড্রোফোবিক এবং ডাইপোল মিথস্ক্রিয়া দ্বারা প্রোটিনগুলি PVDF ঝিল্লির সাথে আবদ্ধ হয়৷ |
| ঝিল্লির প্রকৃতি | |
| নাইট্রোসেলুলোজ ভঙ্গুর এবং ভঙ্গুর। যাইহোক, নাইট্রোসেলুলোজের সংস্করণ উপলব্ধ, এবং তারা প্রতিরোধী। | PVDF আরও টেকসই এবং রাসায়নিক প্রতিরোধ ক্ষমতা বেশি৷ |
| ফালা এবং পুনরায় ব্যবহার করার ক্ষমতা | |
| নাইট্রোসেলুলোজ সিগন্যাল না হারিয়ে ছিনতাই করতে এবং রিপ্রোব করতে অসুবিধা হতে পারে। | PVDF রিপ্রোবিং এবং সিকোয়েন্সিং অ্যাপ্লিকেশনের জন্য আদর্শ৷ |
| উপযুক্ততা | |
| নাইট্রোসেলুলোজ কম আণবিক ওজন প্রোটিন সনাক্ত করার জন্য আদর্শ। | PVDF উচ্চতর আণবিক ওজন প্রোটিন সনাক্ত করার জন্য আরও উপযুক্ত৷ |
| অন্যান্য ব্যবহার | |
| নাইট্রোসেলুলোজ নিউক্লিক অ্যাসিড বিশ্লেষণ এবং ডট/স্লট ব্লটিং এর জন্য ব্যবহার করা যেতে পারে। | PVDF প্রোটিন সিকোয়েন্সিং এবং কঠিন ফেজ অ্যাস সিস্টেমের জন্য ব্যবহার করা যেতে পারে। |
| খরচ | |
| এটি PVDF ঝিল্লির চেয়ে সস্তা৷ | এটি নাইট্রোসেলুলোজ ঝিল্লির চেয়ে বেশি ব্যয়বহুল। |
| প্রি-ওয়েটিং এর প্রয়োজন | |
| নাইট্রোসেলুলোজ ঝিল্লি মিথেনল দিয়ে আগে ভিজানোর প্রয়োজন হয় না | PVDF মেমব্রেনের জন্য মিথানল দিয়ে ভিজিয়ে রাখা প্রয়োজন। |
সারাংশ – নাইট্রোসেলুলোজ বনাম PVDF
নাইট্রোসেলুলোজ ঝিল্লি ছিল পার্শ্বীয় প্রবাহ পরীক্ষা করার জন্য বাণিজ্যিকভাবে ব্যবহৃত প্রথম ঝিল্লি। প্রোটিন শোষণের জন্য তাদের উচ্চ ক্ষমতা রয়েছে। অতএব, নাইট্রোসেলুলোজ ঝিল্লি পশ্চিমা ব্লটিং ব্যবহার করা হয়। PVDF হল ওয়েস্টার্ন ব্লটিং-এ ব্যবহৃত আরেক ধরনের ঝিল্লি এবং এটির উচ্চ প্রোটিন শোষণ ক্ষমতাও রয়েছে। উভয় প্রকার প্রোটিন বিশ্লেষণের জন্য ওয়েস্টার্ন ব্লটিং-এ ব্যবহৃত হয়। যাইহোক, PVDF ঝিল্লির আরও বিশেষ বৈশিষ্ট্য রয়েছে, যা তাদেরকে ওয়েস্টার্ন ব্লটিং-এর জন্য নাইট্রোসেলুলোজ ঝিল্লির চেয়ে বেশি উপযুক্ত করে তোলে। কিন্তু, নাইট্রোসেলুলোজ ঝিল্লি কম আণবিক ওজনযুক্ত প্রোটিন সনাক্ত করার জন্য আরও উপযুক্ত, PVDF ঝিল্লি উচ্চ আণবিক ওজনযুক্ত প্রোটিন সনাক্ত করার জন্য আরও উপযুক্ত।এটি নাইট্রোসেলুলোজ এবং পিভিডিএফ ঝিল্লির মধ্যে পার্থক্য।
