PCR বনাম রিয়েল-টাইম PCR
পিসিআর বা পলিমারেজ চেইন প্রতিক্রিয়া আধুনিক আণবিক জীববিজ্ঞানের একটি বৈপ্লবিক আবিষ্কার, যা প্রথম 1983 সালে রসায়নবিদ ক্যারি মুলিস দ্বারা বিকশিত হয়েছিল। এটি বিশ্লেষণের জন্য একটি জটিল ডিএনএ-তে একটি একক ক্রম প্রসারিত করার অনুমতি দেয়। পিসিআর-এর মূল ধারণা হল যে দুটি প্রাইমার, যা একটি ডিএনএ সিকোয়েন্সের বিপরীত স্ট্র্যান্ডের পরিপূরক, একে অপরের দিকে অভিমুখী; প্রাইমারগুলি পরিপূরক স্ট্র্যান্ড তৈরি করে, প্রতিটিতে অন্য প্রাইমার থাকে। সুতরাং, ফলাফল হল দুটি প্রাইমারের মধ্যে অবস্থিত ডিএনএ-এর সাথে সঙ্গতিপূর্ণ একটি অনুক্রমের একটি বড় পরিমাণ। ডিএনএ পলিমারেজ এনজাইম পিসিআর-এ প্রাইমারগুলি প্রসারিত করতে ব্যবহৃত হয়।ডিএনএ পলিমারেজ হল একটি থার্মোস্টেবল এনজাইম, এবং এটির উচ্চ তাপমাত্রায় (94 থেকে 95 ডিগ্রি সেলসিয়াস) বেঁচে থাকার ক্ষমতা রয়েছে যা টেমপ্লেট ডিএনএ বিকৃতকরণের জন্য ব্যবহৃত হয়।
PCR-তে তিনটি ধাপ জড়িত, যথা, বারবার বিকৃতকরণ, প্রাইমারের অ্যানিলিং এবং ডিএনএ সংশ্লেষণ। এই প্রতিক্রিয়া সঞ্চালনের জন্য একটি থার্মোসাইক্লার মেশিন ব্যবহার করা হয় যাতে এটি দ্রুত এবং সঠিকভাবে তাপমাত্রা পরিবর্তন করার জন্য প্রোগ্রাম করা যায়। পিসিআর-এর প্রয়োগগুলি হল অপরাধ তদন্ত, ডিএনএ ফিঙ্গারপ্রিন্ট, প্যাথোজেন সনাক্তকরণ এবং প্রাথমিক মানব প্রজাতির ডিএনএ বিশ্লেষণ।
প্রচলিত পিসিআর কি?
প্রচলিত পিসিআরের তিনটি প্রধান পর্যায় রয়েছে, যথা; ডিএনএ পরিবর্ধন পর্যায়, পিসিআর পৃথকীকরণ, এবং পণ্য সনাক্তকরণ। ডিএনএ অংশগুলির পৃথকীকরণ সাধারণত অ্যাগারোজ জেল ইলেক্ট্রোফোরেসিস দ্বারা সম্পন্ন হয়। তারপরে পণ্যগুলি ইথিডুইম ব্রোমাইড দিয়ে দাগ দেওয়া হয়। অবশেষে, ইউভি আলোর অধীনে জেলগুলিতে ব্যান্ডগুলির ভিজ্যুয়ালাইজেশন দ্বারা সনাক্তকরণ অর্জন করা হয়। অতএব, প্রচলিত পিসিআরের চূড়ান্ত ফলাফল সংখ্যা হিসাবে প্রকাশ করা হয় না।সাধারণত প্রচলিত পিসিআর শুধুমাত্র একটি প্যারামিটার সনাক্ত করতে সক্ষম।
রিয়েল-টাইম পিসিআর কি?
রিয়েল-টাইম পিসিআর পণ্যগুলির পরিবর্ধন সনাক্ত করতে পারে, কারণ পণ্যগুলি সংশ্লেষিত হয়। প্রযুক্তির বিকাশের সাথে, পিসিআর একটি খুব জনপ্রিয় কৌশল হয়ে উঠেছে, বিশেষ করে খাবারে ব্যাকটেরিয়া সনাক্তকরণ এবং সনাক্তকরণের জন্য। রিয়েল-টাইম পিসিআর একটি ফ্লোরসেন্ট ডাই সিস্টেম এবং ফ্লুরোসেন্ট সনাক্তকরণ ক্ষমতা দিয়ে সজ্জিত থার্মোসাইক্লার ব্যবহার করে।
প্রচলিত পিসিআর এবং রিয়েল-টাইম পিসিআর-এর মধ্যে পার্থক্য কী?
• প্রচলিত পিসিআর আরও বেশি সময় সাপেক্ষ কারণ এটি পরিবর্ধিত পিসিআর পণ্যগুলি বিশ্লেষণ করতে জেল ইলেক্ট্রোফোরেসিস ব্যবহার করে। বিপরীতে, রিয়েল-টাইম পিসিআর কম সময় সাপেক্ষ কারণ এটি প্রতিক্রিয়ার প্রাথমিক পর্যায়ে পরিবর্ধন সনাক্ত করতে পারে।
• রিয়েল-টাইম পিসিআর পিসিআর-এর সূচকীয় বৃদ্ধির পর্যায়ে ডেটা সংগ্রহ করে যখন প্রথাগত পিসিআর প্রতিক্রিয়ার শেষ-বিন্দুতে ডেটা সংগ্রহ করে৷
• প্রচলিত পিসিআর-এর শেষ বিন্দুর ফলাফল খুব সুনির্দিষ্ট নাও হতে পারে, কিন্তু রিয়েল-টাইম পিসিআর-এর ফলাফল খুব সুনির্দিষ্ট।
• রিয়েল-টাইম পিসিআর প্রচলিত পিসিআর থেকে বেশি সংবেদনশীল।
• প্রচলিত পিসিআর-এর রেজোলিউশন খুব কম থাকে যখন রিয়েল-টাইম পিসিআর উচ্চ রেজোলিউশনের কারণে খুব কম পরিবর্তন শনাক্ত করতে পারে৷
• প্রচলিত পিসিআর-এর শেষ বিন্দু সনাক্তকরণের সংক্ষিপ্ত গতিশীল পরিসর থাকে যখন রিয়েল-টাইম পিসিআর সনাক্তকরণের বিস্তৃত গতিশীল পরিসীমা থাকে।
• প্রচলিত পিসিআর থেকে ভিন্ন, স্বয়ংক্রিয় সনাক্তকরণ কৌশলগুলি রিয়েল-টাইম পিসিআর-এ পাওয়া যায়।
• প্রচলিত পিসিআর রিয়েল-টাইম পিসিআরের তুলনায় অত্যন্ত পরিশীলিত এবং শ্রমঘন।
• রিয়েল-টাইম পিসিআর থেকে ভিন্ন, প্রচলিত পিসিআর মৃত এবং জীবিত ব্যাকটেরিয়ার মধ্যে বৈষম্য করতে পারে না।
• রিয়েল-টাইম পিসিআর পণ্যগুলি সনাক্ত করতে ফ্লুরোসেন্ট ডাই সিস্টেম ব্যবহার করে যখন প্রচলিত পিসিআর অ্যাগারোজ জেল মাধ্যমের ব্যান্ডগুলি কল্পনা করতে ইথিডিয়াম ব্রোমাইড এবং ইউভি আলো ব্যবহার করে৷
