গোল্ডেন গেট এবং গিবসন অ্যাসেম্বলির মধ্যে মূল পার্থক্য হল যে গোল্ডেন গেট ক্লোন করার জন্য একটি নির্দিষ্ট সিকোয়েন্সের মধ্যে সীমাবদ্ধতার সাইটগুলির উপস্থিতির উপর নির্ভর করে, যখন গিবসন অ্যাসেম্বলি একটি নির্দিষ্ট অনুক্রমের মধ্যে সীমাবদ্ধতার সাইটগুলির উপস্থিতির উপর নির্ভর করে না ক্লোন করা হবে।
গত কয়েক দশক ধরে, আণবিক বিজ্ঞানীরা বিভিন্ন প্রমিত পদ্ধতি তৈরি করেছেন যা একাধিক ডিএনএ খণ্ডকে একটি একক অংশে সহজে একত্রিত করার অনুমতি দেয়। তাই, ক্লোনিং পদ্ধতি যেমন রেস্ট্রিকশন এনজাইম লিগেশন, গেটওয়ে ক্লোনিং, গিবসন অ্যাসেম্বলি, গোল্ডেন গেট অ্যাসেম্বলি এবং টোপো ক্লোনিং ব্যাপকভাবে বৈজ্ঞানিক পরীক্ষায় গবেষকরা ব্যবহার করেন।অতএব, গোল্ডেন গেট এবং গিবসন অ্যাসেম্বলি হল দুটি আণবিক ক্লোনিং পদ্ধতি যা একাধিক ডিএনএ খণ্ডকে একক অংশে একত্রিত করতে দেয়৷
গোল্ডেন গেট সমাবেশ কি?
গোল্ডেন গেট হল একটি আণবিক ক্লোনিং পদ্ধতি যা একাধিক ডিএনএ খণ্ডকে একক অংশে একত্রিত করতে সাহায্য করে। এই পদ্ধতিটি ক্লোন করার জন্য একটি নির্দিষ্ট অনুক্রমের মধ্যে সীমাবদ্ধতার সাইটগুলির উপস্থিতির উপর নির্ভর করে। এটি 1996 সালে উদ্ভূত হয়েছিল। এই কৌশলটি টাইপ IIS সীমাবদ্ধতা এনজাইম এবং T4 DNA ligase ব্যবহার করে। এই এনজাইমগুলি সনাক্তকরণের স্থানগুলির বাইরে ডিএনএ কেটে দেয়। তারা নন-প্যালিনড্রোমিক ওভারহ্যাং তৈরি করতে পারে। অতএব, ওভারহ্যাং সিকোয়েন্সের সংমিশ্রণ ব্যবহার করে ডিএনএর একাধিক খণ্ডকে একত্রিত করা যেতে পারে।
চিত্র 01: গোল্ডেন গেট
গোল্ডেন গেট সমাবেশ পদ্ধতি
গোল্ডেন গেট কৌশলটির পদ্ধতিতে প্রধান তিনটি ধাপ রয়েছে:
- ক্লোনিং ভেক্টরে ওভারহ্যাংগুলির সৃষ্টি,
- অধিকাংশে খণ্ড-নির্দিষ্ট ক্রম ব্যবহার করে একাধিক ডিএনএ সন্নিবেশের সমাবেশ, এবং
- বন্ধন।
গোল্ডেন গেট সমাবেশ বৃত্তাকার ক্লোনিং ভেক্টর (গন্তব্য ভেক্টর) ব্যবহার করে। তদ্ব্যতীত, এই পদ্ধতিতে, একই সাথে হজম এবং বন্ধন সম্পন্ন করার জন্য সীমাবদ্ধ পণ্য থেকে সীমাবদ্ধতা স্থানটি বাদ দেওয়া হয়। গোল্ডেন গেটের জন্য একটি সাধারণ তাপচক্র প্রোটোকল 37 °C এবং 16 °C এর মধ্যে দোলা দেয় কারণ 37 °C সীমাবদ্ধ এনজাইমের জন্য সর্বোত্তম এবং 16 °C লাইগাসের জন্য সর্বোত্তম৷
গিবসন সমাবেশ কি?
গিবসন অ্যাসেম্বলি হল একটি আণবিক ক্লোনিং পদ্ধতি যা একাধিক ডিএনএ খণ্ডকে একক অংশে সমাবেশ করার অনুমতি দেয়। গোল্ডেন গেট পদ্ধতির বিপরীতে, এই পদ্ধতিটি ক্লোন করার জন্য একটি নির্দিষ্ট অনুক্রমের মধ্যে সীমাবদ্ধতার সাইটগুলির উপস্থিতির উপর নির্ভর করে না।এটি জে ক্রেগ ভেন্টার ইনস্টিটিউটের ড্যানিয়েল জি গিবসন দ্বারা পাওয়া গেছে। এই কৌশলটি এক ধরনের সিকোয়েন্স এবং লিগেজ স্বাধীন ক্লোনিং (SLIC) পদ্ধতি।
চিত্র 02: গিবসন সমাবেশ
গিবসন সমাবেশ পদ্ধতি
গিবসন অ্যাসেম্বলির ডিএনএ টুকরা প্রয়োজন যাতে 20-40 বেস জোড়া সন্নিহিত ডিএনএ টুকরাগুলির সাথে ওভারল্যাপ করা হয়। ওভারল্যাপগুলি PCR এর মাধ্যমে যোগ করা হয়। তারপর এই ডিএনএ খণ্ডগুলো গিবসন মেসার মিশ্রণে যোগ করা হয় যাতে তিনটি এনজাইম থাকে। এই প্রক্রিয়াটি তিনটি ভিন্ন এনজাইম ব্যবহার করে আইসোথার্মাল অবস্থার অধীনে (1 ঘন্টার জন্য 50 °সে) সঞ্চালিত হয়: এক্সোনুক্লিজ, ডিএনএ পলিমারেজ এবং ডিএনএ লিগেজ। এক্সোনুক্লিজ 5’ প্রান্ত থেকে ডিএনএকে চিবিয়ে নেয়। সুতরাং, এটি পলিমারেজ কার্যকলাপকে বাধা দেয় না এবং প্রতিক্রিয়াটিকে একটি একক প্রক্রিয়ায় এগিয়ে যেতে দেয়।ওভারল্যাপ সিকোয়েন্সের কারণে সংলগ্ন ডিএনএ খণ্ডের ফলে একক-অবস্থিত অঞ্চলগুলিকে অ্যানিল করা যেতে পারে। ডিএনএ পলিমারেজ নিউক্লিওটাইড যোগ করে শূন্যস্থান পূরণ করে। অবশেষে, ডিএনএ লিগেস সহসংলগ্ন অংশগুলির ডিএনএ-তে যোগদান করে। সাধারণত, গিবসন সমাবেশ লিনিয়ারাইজড গন্তব্য ভেক্টর ব্যবহার করে। তদুপরি, এই পদ্ধতিটি একই সাথে 15টি ডিএনএ টুকরোকে ক্রম সাদৃশ্যের ভিত্তিতে একত্রিত করতে পারে৷
গোল্ডেন গেট এবং গিবসন অ্যাসেম্বলির মধ্যে মিল
- গোল্ডেন গেট এবং গিবসন অ্যাসেম্বলি হল দুটি আণবিক ক্লোনিং পদ্ধতি।
- উভয় পদ্ধতিই একাধিক ডিএনএ খণ্ডকে একক অংশে একত্রিত করতে পারে।
- এই পদ্ধতিগুলো গন্তব্য ভেক্টর ব্যবহার করে।
- উভয় পদ্ধতিই একাধিক ডিএনএ খণ্ডের সমাবেশের জন্য থার্মাল সাইক্লার ব্যবহার করে।
- এগুলি সাইট নির্দেশিত মিউটাজেনেসিসে ব্যবহৃত হয়।
গোল্ডেন গেট এবং গিবসন অ্যাসেম্বলির মধ্যে পার্থক্য
গোল্ডেন গেট হল একটি আণবিক ক্লোনিং পদ্ধতি যা একাধিক ডিএনএ খণ্ডের সমাবেশে একটি একক অংশে ব্যবহৃত হয় যা ক্লোন করার জন্য একটি নির্দিষ্ট অনুক্রমের মধ্যে সীমাবদ্ধতার সাইটগুলির উপস্থিতির উপর নির্ভর করে, যখন গিবসন অ্যাসেম্বলি একটি আণবিক ক্লোনিং পদ্ধতিতে ব্যবহৃত হয়। ক্লোন করার জন্য একটি নির্দিষ্ট অনুক্রমের মধ্যে সীমাবদ্ধতার সাইটগুলির উপস্থিতির উপর নির্ভর না করে একাধিক ডিএনএ খণ্ডকে একক অংশে একত্রিত করা।এটি গোল্ডেন গেট এবং গিবসন অ্যাসেম্বলির মধ্যে মূল পার্থক্য। অধিকন্তু, গোল্ডেন গেট পদ্ধতি একটি বৃত্তাকার গন্তব্য ভেক্টর ব্যবহার করে, যখন গিবসন সমাবেশ পদ্ধতি একটি লিনিয়ারাইজড গন্তব্য ভেক্টর ব্যবহার করে।
নিম্নলিখিত ইনফোগ্রাফিকটি গোল্ডেন গেট এবং গিবসন অ্যাসেম্বলির মধ্যে পার্থক্য সারণী করে৷
সারাংশ – গোল্ডেন গেট বনাম গিবসন সমাবেশ
আণবিক ক্লোনিং হল একটি পদ্ধতি যা রিকম্বিন্যান্ট ডিএনএ অণুগুলিকে একত্রিত করতে এবং হোস্ট জীবের মধ্যে তাদের প্রতিলিপি পরিচালনা করতে ব্যবহৃত হয়। গোল্ডেন গেট এবং গিবসন অ্যাসেম্বলি হল দুটি আণবিক ক্লোনিং পদ্ধতি যা একাধিক ডিএনএ খণ্ডকে একক অংশে সমাবেশ করার অনুমতি দেয়। গোল্ডেন গেট পদ্ধতি ক্লোন করার জন্য একটি নির্দিষ্ট অনুক্রমের মধ্যে সীমাবদ্ধতার সাইটগুলির উপস্থিতির উপর নির্ভর করে, যখন গিবসন অ্যাসেম্বলি ক্লোন করার জন্য একটি নির্দিষ্ট অনুক্রমের মধ্যে সীমাবদ্ধতার সাইটগুলির উপস্থিতির উপর নির্ভর করে না। সুতরাং, এটি গোল্ডেন গেট এবং গিবসন অ্যাসেম্বলির মধ্যে মূল পার্থক্য।
