মূল পার্থক্য – RAPD বনাম RFLP
জেনেটিক মার্কারগুলি ব্যক্তি এবং প্রজাতির মধ্যে জেনেটিক বৈচিত্র সনাক্ত করতে আণবিক জীববিজ্ঞানে ব্যবহার করা হয়। র্যান্ডম এমপ্লিফাইড পলিমরফিক ডিএনএ (RAPD) এবং সীমাবদ্ধতা ফ্র্যাগমেন্ট লেংথ পলিমরফিজম (RFLP) দুটি গুরুত্বপূর্ণ আণবিক মার্কার যা নিয়মিতভাবে পরীক্ষাগারে ব্যবহৃত হয়। RAPD সংক্ষিপ্ত এবং নির্বিচারে অলিগোনিউক্লিওটাইড প্রাইমারগুলির সাথে সঞ্চালিত হয় এবং এটি জীবের টেমপ্লেট ডিএনএ জুড়ে একাধিক অবস্থানের এলোমেলো পরিবর্ধনের উপর ভিত্তি করে। RFLP একটি নির্দিষ্ট সীমাবদ্ধতা endonuclease সঙ্গে সঞ্চালিত হয়, এবং এটি ফলাফল সীমাবদ্ধতা টুকরা এবং হাইব্রিডাইজেশনের পলিমারফিজমের উপর ভিত্তি করে।RAPL এবং RFLP-এর মধ্যে মূল পার্থক্য হল RAPD হল এক ধরনের PCR কৌশল যা পূর্বের ক্রম জ্ঞান ছাড়াই সম্পাদিত হয় যেখানে RFLP PCR-এর সাথে জড়িত নয় এবং কৌশলটি চালানোর জন্য পূর্বের ক্রম জ্ঞানের প্রয়োজন হয়৷
RAPD কি?
RAPD আণবিক জীববিজ্ঞানে একটি দরকারী আণবিক চিহ্নিতকারী। এটি একটি দ্রুত এবং সহজ কৌশল। RAPD কে একটি পদ্ধতি হিসাবে সংজ্ঞায়িত করা যেতে পারে যার ফলে লক্ষ্য ডিএনএ টেমপ্লেটের একাধিক অবস্থানের এলোমেলো পরিবর্ধনের ফলে পলিমরফিক ডিএনএ সিকোয়েন্স হয়। RAPD পিসিআর পরিবর্ধনের জন্য স্বেচ্ছাচারী ক্রম সহ সংক্ষিপ্ত অলিগোনিউক্লিওটাইড প্রাইমার ব্যবহার করে। প্রাইমারগুলি কৃত্রিমভাবে পূর্বের ক্রম জ্ঞান ছাড়াই সংশ্লেষিত হয়। অতএব, এটি একটি সহজ এবং দরকারী কৌশল হিসাবে বিবেচিত হয়৷
আরএপিডিতে নিম্নলিখিত প্রধান পদক্ষেপগুলি জড়িত।
- লক্ষ্য ডিএনএ নিষ্কাশন
- এলোমেলোভাবে নির্বাচিত প্রাইমার ব্যবহার করে লক্ষ্য ডিএনএর একাধিক অবস্থানের পরিবর্ধন
- পরিবর্ধিত পিসিআর পণ্যের জেল ইলেক্ট্রোফোরেসিস
- ইথিডিয়াম ব্রোমাইড দিয়ে দাগ দেওয়া এবং পলিমারফিজম সনাক্তকরণ
প্রাইমার অ্যানিলিংয়ের তারতম্যের ফলে, প্রশস্তকরণের সময় বিভিন্ন দৈর্ঘ্যের বিভিন্ন টুকরো তৈরি হয়। তাই, জেলের ব্যান্ডিং প্যাটার্ন ব্যক্তি ও প্রজাতির মধ্যে আলাদা। এইভাবে, RAPD সনাক্তকরণ এবং পার্থক্যের মধ্যে জীবের মধ্যে জেনেটিক বৈচিত্র সনাক্ত করতে সক্ষম করে৷
RAPD আণবিক জীববিজ্ঞানের বিভিন্ন গবেষণায় প্রয়োগ করা হয় যেমন ঘনিষ্ঠভাবে সম্পর্কিত প্রজাতির মধ্যে জেনেটিক পার্থক্য সনাক্তকরণ, জিন ম্যাপিং, ডিএনএ ফিঙ্গারপ্রিন্টিং, উত্তরাধিকারসূত্রে প্রাপ্ত রোগ সনাক্তকরণ ইত্যাদি।
চিত্র 01: RAPD
RFLP কি?
রেস্ট্রিকশন ফ্র্যাগমেন্ট লেংথ পলিমরফিজম (RFLPs) হল একটি আণবিক মার্কার যা আণবিক জীববিজ্ঞানে সমজাতীয় ডিএনএ সিকোয়েন্সের জেনেটিক বৈচিত্র সনাক্তকরণের জন্য ব্যবহৃত হয়। এটি ডিএনএ ফিঙ্গারপ্রিন্টিংয়ের জন্য তৈরি প্রথম জেনেটিক মার্কার। নির্দিষ্ট সীমাবদ্ধ এনজাইম দ্বারা সীমাবদ্ধ থাকাকালীন সমস্ত জীব অনন্য ডিএনএ প্রোফাইল তৈরি করে। আরএফএলপি ব্যক্তিদের অনন্য ডিএনএ প্রোফাইল তৈরি করতে এবং তাদের মধ্যে জেনেটিক বৈচিত্র্য সনাক্তকরণে একটি গুরুত্বপূর্ণ হাতিয়ার হিসেবে কাজ করে। যখন ডিএনএ নমুনাগুলি নির্দিষ্ট সীমাবদ্ধতার এন্ডোনিউক্লিজ দিয়ে হজম করা হয়, তখন এটি বিভিন্ন ডিএনএ প্রোফাইল তৈরি করে যা প্রতিটি ব্যক্তির জন্য অনন্য। সুতরাং, এই পদ্ধতির প্রধান হল নির্দিষ্ট সীমাবদ্ধ এনজাইমগুলির সাথে সমজাতীয় ডিএনএ সীমাবদ্ধ করে এবং জেল ইলেক্ট্রোফোরেসিস এবং ব্লটিং এর মাধ্যমে খণ্ডের দৈর্ঘ্যের পলিমারফিজমের বিশ্লেষণ করে জীবের মধ্যে জেনেটিক বৈচিত্র্য সনাক্ত করা। ব্লটিং প্যাটার্ন প্রতিটি জীবের জন্য অনন্য এবং নির্দিষ্ট জিনোটাইপগুলিকে চিহ্নিত করে৷
আরএফএলপির সাথে নিম্নলিখিত পদক্ষেপগুলি জড়িত৷
- নমুনা থেকে পর্যাপ্ত পরিমাণে ডিএনএ বিচ্ছিন্ন করা
- সংক্ষিপ্ত ক্রমানুসারে নির্দিষ্ট সীমাবদ্ধতা সহ ডিএনএ নমুনার খণ্ডিতকরণ
- আগারোজ জেল ইলেক্ট্রোফোরেসিস দ্বারা বিভিন্ন দৈর্ঘ্যের ফলিত টুকরো বিভাজন।
- দক্ষিণ ব্লটিং দ্বারা জেল প্রোফাইলের একটি ঝিল্লিতে স্থানান্তর
- লেবেলযুক্ত প্রোব সহ ঝিল্লির হাইব্রিডাইজেশন এবং প্রতিটি প্রোফাইলে খণ্ডের দৈর্ঘ্য পলিমারফিজমের বিশ্লেষণ
RFLP এর বিভিন্ন অ্যাপ্লিকেশন রয়েছে যেমন উত্তরাধিকার রোগ নির্ণয়, জিনোম ম্যাপিং, ফরেনসিক স্টাডিতে অপরাধী সনাক্তকরণ, পিতৃত্ব পরীক্ষা ইত্যাদি।
চিত্র 02: RFLP জিনোটাইপিং
RAPD এবং RFLP এর মধ্যে পার্থক্য কী?
RAPD বনাম RFLP |
|
| RAPD হল র্যান্ডম প্রাইমার এবং পিসিআর-এর উপর ভিত্তি করে একটি আণবিক চিহ্নিতকারী৷ | RFLP একটি আণবিক চিহ্নিতকারী যা বিভিন্ন দৈর্ঘ্যের সীমাবদ্ধতা খন্ডের উৎপাদনের উপর ভিত্তি করে। |
| প্রয়োজনীয় নমুনা | |
| RAPD বিশ্লেষণের জন্য ছোট ডিএনএ নমুনাই যথেষ্ট৷ | RFLP বিশ্লেষণের জন্য প্রচুর পরিমাণে নিষ্কাশিত ডিএনএ নমুনা প্রয়োজন৷ |
| সময় | |
| RAPD একটি দ্রুত প্রক্রিয়া। | RFLP একটি সময়সাপেক্ষ প্রক্রিয়া৷ |
| প্রাইমার ব্যবহার | |
| এলোমেলো প্রাইমার ব্যবহার করা হয় এবং একই প্রাইমার বিভিন্ন প্রজাতির জন্য ব্যবহার করা যেতে পারে। | সংকরকরণের জন্য RFLP-তে প্রজাতি-নির্দিষ্ট প্রোব ব্যবহার করা হয়। |
| নির্ভরযোগ্যতা | |
| আরএফএলপির তুলনায় প্রযুক্তিটির নির্ভরযোগ্যতা কম৷ | RFLP একটি নির্ভরযোগ্য কৌশল। |
| ব্লটিং | |
| RAPD দক্ষিণ ব্লটিং জড়িত৷ | দক্ষিণ ব্লটিং হল আরএফএলপির এক ধাপ। |
| অ্যালিলিক প্রকরণ সনাক্তকরণ | |
| আরএপিডি দ্বারা অ্যালিলিক বৈচিত্র সনাক্ত করা যায় না। | আরএফএলপি দ্বারা অ্যালিলিক বৈচিত্র সনাক্ত করা যেতে পারে। |
| ক্রম জ্ঞানের প্রয়োজন | |
| RAPD এর পূর্বে ক্রম জ্ঞানের প্রয়োজন নেই। | প্রোব ডিজাইন করার জন্য পূর্বের ক্রম জ্ঞান প্রয়োজন। |
| PCR | |
| PCR RAPD এর সাথে জড়িত | PCR RFLP এর সাথে জড়িত নয়। |
| প্রজননযোগ্যতা | |
| RAPD এর কম প্রজননযোগ্যতা আছে | RFLP এর RAPD এর তুলনায় উচ্চ প্রজননযোগ্যতা রয়েছে। |
সারাংশ – RAPD বনাম RFLP
RAPD এবং RFLP হল আণবিক জীববিজ্ঞানে ব্যবহৃত গুরুত্বপূর্ণ মার্কার। উভয় পদ্ধতিই জীবের মধ্যে জেনেটিক বৈচিত্র্য সনাক্ত করতে সক্ষম। RAPD এলোমেলো প্রাইমার ব্যবহার করে সঞ্চালিত হয়। RFLP নির্দিষ্ট সীমাবদ্ধতা এনজাইম ব্যবহার করে সঞ্চালিত হয়। উভয় পদ্ধতিই পৃথক জীবের জন্য অনন্য ডিএনএ প্রোফাইল তৈরি করে। আরএপিডি আরএফএলপির তুলনায় তুলনামূলকভাবে কয়েক ধাপ জড়িত। কিন্তু এটি আরএফএলপির তুলনায় কম নির্ভরযোগ্য এবং পুনরুৎপাদনযোগ্য ফলাফল দেয়। এটি RAPD এবং RFLP এর মধ্যে প্রধান পার্থক্য।
