মূল পার্থক্য – AFLP বনাম RFLP
ডিএনএ অধ্যয়নের ফাইলোজেনেটিক সম্পর্ক বোঝা এবং নির্ধারণ, জেনেটিক রোগ নির্ণয় এবং জীবের জিনোম ম্যাপ করার ক্ষেত্রে একটি অপরিসীম গুরুত্ব রয়েছে। ডিএনএ বিশ্লেষণের সাথে যুক্ত বেশ কয়েকটি কৌশল অজানা ডিএনএর পুলে একটি নির্দিষ্ট জিন বা একটি ডিএনএ ক্রম সনাক্তকরণের জন্যও ব্যবহৃত হয়। তারা আণবিক চিহ্নিতকারী হিসাবে পরিচিত। অ্যামপ্লিফাইড ফ্র্যাগমেন্ট লেংথ পলিমরফিজম (এএফএলপি) এবং রেস্ট্রিকশন ফ্র্যাগমেন্ট লেংথ পলিমরফিজম (আরএফএলপি) হল দুটি আণবিক মার্কার (পদ্ধতি) যা আণবিক জীববিজ্ঞানে জীবের মধ্যে জেনেটিক বৈচিত্র্য সনাক্ত করার জন্য তৈরি করা হয়েছে। উভয় পদ্ধতি সমানভাবে গুরুত্বপূর্ণ এবং সুবিধা এবং অসুবিধা আছে।AFLP এবং RFLP-এর মধ্যে মূল পার্থক্য হল যে AFLP-তে পরিপাককৃত DNA-এর নির্বাচনী PCR পরিবর্ধন অন্তর্ভুক্ত থাকে যখন RFLP-তে DNA খণ্ডের নির্বাচনী PCR পরিবর্ধন জড়িত থাকে না৷
AFLP কি?
AFLP (এম্প্লিফাইড ফ্র্যাগমেন্ট লেংথ পলিমরফিজম) হল আণবিক জীববিজ্ঞানের একটি গুরুত্বপূর্ণ হাতিয়ার এবং জেনেটিক প্রকরণ বিশ্লেষণে ব্যাপকভাবে ব্যবহৃত হয়। AFLP খণ্ডিত জিনোমিক ডিএনএর নির্দিষ্ট পিসিআর পরিবর্ধন এবং জেল ইলেক্ট্রোফোরসিসের মাধ্যমে অটোরেডিওগ্রাফ দ্বারা পলিমরফিজম সনাক্তকরণের উপর ভিত্তি করে। AFLP ব্যাপকভাবে উদ্ভিদ, প্রাণী, ব্যাকটেরিয়া এবং ছত্রাক সহ বিভিন্ন রাজ্যের স্ট্রেন বা ঘনিষ্ঠভাবে সম্পর্কিত প্রজাতির জেনেটিক পার্থক্য সনাক্ত করতে অবদান রাখে। অল্প পরিমাণে অজানা ডিএনএ নমুনা দিয়ে AFLP করা যেতে পারে। এর জন্য পূর্বের সিকোয়েন্স জ্ঞান এবং প্রোবের ডিজাইনের প্রয়োজন নেই।
AFLP এর ধাপ
- DNA এর বিচ্ছিন্নতা
- সীমাবদ্ধ এন্ডোনিউক্লিজ সহ ডিএনএর পরিপাক
- অ্যাডাপ্টরের সাথে সীমাবদ্ধ ডিএনএ খণ্ডের লিগেশন
- নির্দিষ্ট নিষেধাজ্ঞার সাইট সহ খণ্ডগুলির নির্বাচনী পরিবর্ধন
- জেল ইলেক্ট্রোফোরেসিস দ্বারা পিসিআর পণ্যগুলির পৃথকীকরণ
- অটোরেডিওগ্রাফ দ্বারা জেল ম্যাট্রিক্সের ভিজ্যুয়ালাইজেশন
AFLP একটি আরও সংবেদনশীল এবং পুনরুৎপাদনযোগ্য পদ্ধতি যা ডিএনএ সিকোয়েন্সের পূর্বে জ্ঞান ছাড়াই ছত্রাক, ব্যাকটেরিয়া, উদ্ভিদ এবং প্রাণী সহ বিভিন্ন ট্যাক্সার ডিএনএ প্রোফাইলিংয়ে ব্যবহার করা যেতে পারে। এটি অত্যন্ত সংবেদনশীল প্রকৃতির কারণে জনসংখ্যার ব্যক্তিদের মধ্যে সামান্য পার্থক্য সনাক্ত করতে সহায়তা করে। জিনোম ম্যাপিং, ফরেনসিক অধ্যয়ন, পিতামাতার পরীক্ষা, জিনোটাইপিং ইত্যাদিতেও AFLP গুরুত্বপূর্ণ।
চিত্র 01: AFLP
RFLP কি?
রেস্ট্রিকশন ফ্র্যাগমেন্ট লেংথ পলিমরফিজম (RFLPs) হল একটি কৌশল যা সমজাতীয় ডিএনএ সিকোয়েন্সের জেনেটিক বৈচিত্র্য সনাক্ত করতে ব্যবহৃত হয়।এটি ডিএনএ প্রোফাইলিংয়ের জন্য তৈরি প্রথম পদ্ধতি। জীবের অনন্য ডিএনএ আঙ্গুলের ছাপ বা ডিএনএ প্রোফাইল রয়েছে। RFLP অন্তঃস্পেসিফিক বা ঘনিষ্ঠভাবে সম্পর্কিত জীবের ডিএনএ প্রোফাইলের মধ্যে পার্থক্য বিশ্লেষণ করার জন্য একটি গুরুত্বপূর্ণ হাতিয়ার হিসাবে কাজ করে যেহেতু সমজাতীয় ক্রমগুলির বিভিন্ন সীমাবদ্ধতা সাইট (অবস্থান) থাকে যা একটি নির্দিষ্ট জীবের জন্য অনন্য। যখন হোমোলগাস ডিএনএ নির্দিষ্ট সীমাবদ্ধতার এন্ডোনিউক্লিজের সাথে হজম হয়, তখন এর ফলে বিভিন্ন ডিএনএ প্রোফাইল তৈরি হয় যা প্রতিটি ব্যক্তির জন্য অনন্য। সুতরাং, এই পদ্ধতির প্রধান হল নির্দিষ্ট সীমাবদ্ধ এনজাইমগুলির সাথে সমজাতীয় ডিএনএ সীমাবদ্ধ করে এবং জেল ইলেক্ট্রোফোরেসিস এবং ব্লটিং এর মাধ্যমে খণ্ডের দৈর্ঘ্যের পলিমারফিজমের বিশ্লেষণ করে জীবের মধ্যে জেনেটিক বৈচিত্র্য সনাক্ত করা। ব্লটিং প্যাটার্ন প্রতিটি জীবের জন্য অনন্য এবং নির্দিষ্ট জিনোটাইপগুলিকে চিহ্নিত করে৷
RFLP এর ধাপ
- নমুনা থেকে পর্যাপ্ত পরিমাণে ডিএনএ বিচ্ছিন্ন করা
- সংক্ষিপ্ত ক্রমানুসারে নির্দিষ্ট সীমাবদ্ধতা সহ ডিএনএ নমুনার খণ্ডিতকরণ
- আগারোজ জেল ইলেক্ট্রোফোরেসিস দ্বারা বিভিন্ন দৈর্ঘ্যের ফলিত টুকরো বিভাজন।
- দক্ষিণ ব্লটিং দ্বারা জেল প্রোফাইলের একটি ঝিল্লিতে স্থানান্তর
- লেবেলযুক্ত প্রোব সহ ঝিল্লির হাইব্রিডাইজেশন এবং প্রতিটি প্রোফাইলে খণ্ডের দৈর্ঘ্য পলিমারফিজমের বিশ্লেষণ
RFLP রোগের উত্তরাধিকার শনাক্তকরণ এবং পরিবারের সদস্যদের মধ্যে রোগ হওয়ার ঝুঁকি খুঁজে বের করার জন্য একটি অত্যন্ত গুরুত্বপূর্ণ কৌশল। আরএফএলপি প্রায়শই জিনোম ম্যাপিং, ফরেনসিক, পিতৃত্ব পরীক্ষা ইত্যাদিতে অপরাধীদের সনাক্তকরণে ব্যবহৃত হয়। আরএফএলপি-এরও বেশ কিছু সীমাবদ্ধতা রয়েছে। হাইব্রিডাইজেশনের জন্য প্রোব ডিজাইন করতে RFLP-এর সিকোয়েন্স ডেটার পূর্ব জ্ঞান প্রয়োজন। এটি বিশ্লেষণের জন্য নমুনা থেকে পর্যাপ্ত পরিমাণে ডিএনএ বিচ্ছিন্ন করার প্রয়োজন, যা ফরেনসিক গবেষণায় কঠিন৷
চিত্র 01: RRFLP ম্যাপিং
AFLP এবং RFLP এর মধ্যে পার্থক্য কি?
ALFP বনাম RFLP |
|
| AFLP-তে পরিপাককৃত ডিএনএ-র নির্বাচনী PCR পরিবর্ধন জড়িত। | RFLP PCR-আরএফএলপি না হলে PCR এর সাথে জড়িত নয়। |
| ক্রম জ্ঞান | |
| আগের ক্রম জ্ঞানের প্রয়োজন নেই। | আরএফএলপি প্রোব ডিজাইন করার জন্য পূর্বের ক্রম জ্ঞান প্রয়োজন। |
| নির্ভরযোগ্যতা | |
| এটি আরও নির্ভরযোগ্য৷ | এএফএলপির তুলনায় এটি কম নির্ভরযোগ্য। |
| পলিমরফিজম সনাক্তকরণে দক্ষতা | |
| আরএফএলপির চেয়ে পলিমরফিজম শনাক্ত করার ক্ষেত্রে এটির দক্ষতা বেশি। | এএফএলপির তুলনায় এটি কম কার্যকর। |
| খরচ | |
| আরএফএলপির তুলনায় এটি একটু ব্যয়বহুল। | এএফএলপির তুলনায় এটি কম ব্যয়বহুল৷ |
| আবেদন | |
| AFLPs জিনোম ম্যাপিং, ডিএনএ ফিঙ্গারপ্রিন্টিং, জেনেটিক ডাইভারসিটি স্টাডিজ, পিতৃত্ব পরীক্ষা এবং ফরেনসিকগুলিতে প্রয়োগ করা হয়েছে | RFLP বিশ্লেষণ হল জিনোম ম্যাপিং, জেনেটিক ব্যাধিগুলির জন্য জিনের স্থানীয়করণ, রোগের ঝুঁকি নির্ধারণ এবং পিতৃত্ব পরীক্ষার একটি গুরুত্বপূর্ণ হাতিয়ার৷ |
সারাংশ – AFLP বনাম RFLP
AFLP এবং RFLP দুটি কৌশল যা বৈচিত্র্যের মূল্যায়ন এবং আণবিক জীববিজ্ঞানে জেনেটিক সম্পর্কের মূল্যায়নের জন্য জেনেটিক মার্কার হিসাবে ব্যবহৃত হয়।AFLP RFLP এর চেয়ে জীবের মধ্যে জেনেটিক পলিমারফিজম সনাক্তকরণের জন্য একটি দক্ষ এবং সংবেদনশীল পদ্ধতি হিসাবে কাজ করে। যাইহোক, যদিও এই উভয় পদ্ধতিরই জিনগত বৈচিত্র্য সনাক্তকরণের বিভিন্ন দক্ষতা রয়েছে, তবুও এগুলি ডিএনএ ফিঙ্গারপ্রিন্টিং এবং রোগ নির্ণয়ের জন্য ব্যবহৃত হয়৷
