মূল পার্থক্য – প্রত্যক্ষ বনাম পরোক্ষ ELISA
একটি এনজাইম-লিঙ্কড ইমিউনোসে (ELISA), যা এনজাইম ইমিউনোসে নামেও পরিচিত, একটি সেরোলজিক্যাল পরীক্ষা যা রক্তে অ্যান্টিবডি সনাক্ত করে। এটি একটি ডায়াগনস্টিক টুল হিসাবে ব্যবহার করা হয় যে রোগী একটি নির্দিষ্ট ধরণের ভাইরাস বা অন্য সংক্রামক এজেন্ট (এন্টিজেন) এর সংস্পর্শে এসেছে কিনা এবং শরীর সংক্রমণের বিরুদ্ধে অ্যান্টিবডি তৈরি করেছে কিনা। ELISA অতীত এবং বর্তমান সংক্রমণ সনাক্ত করতে পারে। তাই, রোগের গভীর বিশ্লেষণের আগে ডাক্তাররা প্রায়শই ELISA একটি প্রিস্ক্রিনিং পরীক্ষা হিসেবে ব্যবহার করেন। রোগীর রক্তের নমুনা নিয়ে পরীক্ষাগারে এই পরীক্ষা করা যেতে পারে।ELISA পরীক্ষা দুই ধরনের হয়: প্রত্যক্ষ ELISA এবং পরোক্ষ ELISA। প্রত্যক্ষ এবং পরোক্ষ ELISA এর মধ্যে মূল পার্থক্য হল যে পরোক্ষ ELISA বেশি সংবেদনশীল এবং একটি সেকেন্ডারি অ্যান্টিবডি যোগ করার প্রয়োজন হয় যখন প্রত্যক্ষ ELISA কম সংবেদনশীল এবং শুধুমাত্র একটি প্রাথমিক অ্যান্টিবডি ব্যবহার করে৷
ডাইরেক্ট এলিসা কি?
ELISA হল একটি রোগ নির্ণয়ের পরীক্ষা যা রক্তে নির্দিষ্ট অ্যান্টিজেন বা অ্যান্টিবডির উপস্থিতি শনাক্ত করার জন্য করা হয়। এটি একটি প্লেট অ্যাস হিসাবে করা হয়। এটি সহজেই অ্যাসেইড এনজাইমের সাথে যুক্ত অ্যান্টিবডি ব্যবহার করে। সিরাম নমুনায় অ্যান্টিজেনের উপস্থিতি এনজাইমের সাথে যুক্ত নির্দিষ্ট অ্যান্টিবডিগুলির সাথে আবদ্ধ হয়। চূড়ান্ত ধাপে, এনজাইমের সাথে বিক্রিয়া করার জন্য একটি নির্দিষ্ট স্তর যুক্ত করা হয়। এনজাইম সাবস্ট্রেটকে রঙিন বা সংকেত-উৎপাদনকারী পণ্যে রূপান্তরিত করে। রাসায়নিক স্তরের রঙ পরিবর্তন সিরাম নমুনায় একটি নির্দিষ্ট অ্যান্টিবডির উপস্থিতি প্রকাশ করে। সরাসরি ELISA পরীক্ষা শুধুমাত্র এনজাইমের সাথে যুক্ত একটি প্রাথমিক অ্যান্টিবডি ব্যবহার করে। অ্যান্টিজেনের সাথে আবদ্ধ হওয়ার পরে, এটি দ্রুত রঙ পরিবর্তন করে, যা রক্তে সংক্রামক এজেন্টের উপস্থিতি নির্দেশ করে।যাইহোক, সংকেতগুলির তীব্রতা সরাসরি ELISA-তে দুর্বল কারণ এপিটোপগুলি অ্যান্টিজেনের বাঁধাইয়ের মধ্যে সীমাবদ্ধ। তাই, পরোক্ষ ELISA এর তুলনায় প্রত্যক্ষ ELISA কম সংবেদনশীল।
চিত্র 01: সরাসরি ELISA পরীক্ষা
পরোক্ষ এলিসা কি?
ELISA দুই ধরনের অ্যান্টিবডি ব্যবহার করে করা যেতে পারে; প্রাথমিক অ্যান্টিবডি এবং সেকেন্ডারি অ্যান্টিবডি। পরোক্ষ ELISA সরঞ্জামটি আরও ভাল সনাক্তকরণের জন্য সংকেতগুলিকে প্রশস্ত করতে উভয় ধরণের অ্যান্টিবডি ব্যবহার করে। পরোক্ষ ELISA কৌশলটি নিম্নরূপ সঞ্চালিত হয়৷
- প্লেটগুলিকে অ্যান্টিজেন দিয়ে ইনকিউব করা হয় এবং অনির্দিষ্ট বাইন্ডিং ব্লক করার জন্য ধুয়ে ফেলা হয়৷
- তারপর প্রাথমিক অ্যান্টিবডি যোগ করে ধুয়ে ফেলা হয়।
- এনজাইম-লিঙ্কড সেকেন্ডারি অ্যান্টিবডি যোগ করা হয় এবং ধুয়ে ফেলা হয়।
- একটি সাবস্ট্রেট যোগ করা হয় এবং এনজাইমের সাথে বিক্রিয়া করার অনুমতি দেওয়া হয়।
- সংকেত সনাক্ত করা হয়, এবং নমুনায় নির্দিষ্ট অ্যান্টিজেনের উপস্থিতি বা অনুপস্থিতি সনাক্ত করা হয়।
পরোক্ষ ELISA পরীক্ষায়, একাধিক সেকেন্ডারি অ্যান্টিবডি একটি প্রাথমিক অ্যান্টিবডির সাথে আবদ্ধ হতে পারে। সেকেন্ডারি অ্যান্টিবডিগুলি সহজে অ্যাসেইড এনজাইমের সাথে যুক্ত। অতএব, একাধিক মিথস্ক্রিয়াগুলির কারণে একটি বাঁধাই একটি শক্তিশালী সংকেত তৈরি করতে পারে। তাই, পরোক্ষ ELISA প্রত্যক্ষ ELISA থেকে বেশি সংবেদনশীল। যাইহোক, সেকেন্ডারি অ্যান্টিবডিগুলির ক্রস প্রতিক্রিয়ার কারণে পরোক্ষ ELISA অনির্দিষ্ট সংকেত তৈরি করতে পারে৷
চিত্র 02: পরোক্ষ এলিসা পরীক্ষা
প্রত্যক্ষ এবং পরোক্ষ এলিসার মধ্যে পার্থক্য কী?
প্রত্যক্ষ বনাম পরোক্ষ ELISA |
|
| প্রত্যক্ষ এলিসা পরোক্ষ এলিসার তুলনায় কম সংবেদনশীল। | পরোক্ষ এলিসা আরও সংবেদনশীল। |
| সময় লেগেছে | |
| সরাসরি ELISA পরীক্ষা একটি দ্রুত প্রক্রিয়া। | পরোক্ষ ELISA সময়সাপেক্ষ। |
| অ্যান্টিবডির ব্যবহার | |
| প্রত্যক্ষ ELISA-এ শুধুমাত্র এক ধরনের অ্যান্টিবডি (প্রাথমিক অ্যান্টিবডি) ব্যবহার করা হয়। | প্রাথমিক এবং সেকেন্ডারি অ্যান্টিবডিগুলি পরোক্ষ ELISA-এর জন্য ব্যবহৃত হয়৷ |
| এনজাইমের সাথে লিঙ্ক | |
| প্রাথমিক অ্যান্টিবডিগুলো এনজাইমের সাথে যুক্ত। | সেকেন্ডারি অ্যান্টিবডি এনজাইমের সাথে যুক্ত। |
| দ্বিতীয় অ্যান্টিবডির ক্রস-রিঅ্যাকটিভিটি | |
| ডাইরেক্ট এলিসা দ্বিতীয় অ্যান্টিবডির ক্রস-রিঅ্যাকটিভিটি দূর করে। | পরোক্ষ ELISA দ্বিতীয় অ্যান্টিবডির ক্রস-রিঅ্যাকটিভিটি দ্বারা প্রভাবিত হয়। |
| সংকেত | |
| পরোক্ষ এলিসার তুলনায় সংকেত দুর্বল। | সংকেতগুলি পরোক্ষ ELISA-তে বিবর্ধিত হয়। অতএব, এটি সনাক্ত করা সহজ। |
সারাংশ – প্রত্যক্ষ বনাম পরোক্ষ ELISA
ELISA হল একটি জৈব রাসায়নিক কৌশল যা রোগীর রক্তের নমুনায় অ্যান্টিবডি বা অ্যান্টিজেনের উপস্থিতি সনাক্ত করতে প্রধানত ইমিউনোলজিতে ব্যবহৃত হয়। এটি প্রত্যক্ষ বা পরোক্ষ ELISA নামে পরিচিত দুটি প্রক্রিয়ার মাধ্যমে সঞ্চালিত হতে পারে। প্রত্যক্ষ ELISA পরীক্ষা শুধুমাত্র প্রাথমিক অ্যান্টিবডি ব্যবহার করে অ্যান্টিজেন সনাক্ত করতে যখন পরোক্ষ ELISA প্রাথমিক এবং মাধ্যমিক উভয় অ্যান্টিবডি ব্যবহার করে।প্রত্যক্ষ ELISA-তে, প্রাথমিক অ্যান্টিবডিগুলিকে লেবেল করা হয় যেখানে পরোক্ষ ELISA-তে সেকেন্ডারি অ্যান্টিবডিগুলি লেবেল করা হয়। এটি প্রত্যক্ষ এবং পরোক্ষ ELISA এর মধ্যে পার্থক্য।
