প্রত্যক্ষ এবং পরোক্ষ ইমিউনোফ্লুরোসেন্সের মধ্যে মূল পার্থক্য হল যে সরাসরি ইমিউনোফ্লুরোসেন্স একটি একক অ্যান্টিবডি ব্যবহার করে যা আগ্রহের লক্ষ্যের বিরুদ্ধে কাজ করে যখন পরোক্ষ ইমিউনোফ্লোরেসেন্স আগ্রহের লক্ষ্য লেবেল করতে দুটি অ্যান্টিবডি ব্যবহার করে।
ইমিউনোফ্লোরেসেন্স বা সেল ইমেজিং হল একটি কৌশল যা একটি নির্দিষ্ট লক্ষ্য অ্যান্টিজেনকে ফ্লুরোফোরের সাথে লেবেল করতে ব্যবহৃত হয়। এখানে, ফ্লুরোফোর হল একটি ফ্লুরোসেন্ট রাসায়নিক যৌগ যা আলোর উত্তেজনায় আলো পুনরায় নির্গত করতে পারে। যখন একটি ফ্লুরোফোর লক্ষ্য অ্যান্টিজেনের সাথে আবদ্ধ হয়, তখন এটি নমুনায় লক্ষ্য অণু সনাক্তকরণের অনুমতি দেয়। এটিকে আরও বর্ণনা করার জন্য, যখন একটি অ্যান্টিজেন একটি নির্দিষ্ট অ্যান্টিবডির সাথে আবদ্ধ হয়, তখন এটি ফ্লুরোফোরসের সাথে সংযুক্ত হতে পারে।তাই, ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপের নিচে পর্যবেক্ষণ করার সময় নমুনায় লক্ষ্য অ্যান্টিজেনের উপস্থিতি সনাক্ত করা সহজ।
এছাড়া, দুটি ধরণের ইমিউনোফ্লুরেসেন্স রয়েছে; প্রত্যক্ষ এবং পরোক্ষ ইমিউনোফ্লোরোসেন্স। প্রত্যক্ষ এবং পরোক্ষ ইমিউনোফ্লোরেসেন্সের মধ্যে পার্থক্য মূলত ব্যবহৃত অ্যান্টিবডির সংখ্যা এবং ফ্লুরোফোর কনজুগেশনের মধ্যে রয়েছে। অর্থাৎ, প্রত্যক্ষ ইমিউনোফ্লোরোসেন্সে, ফ্লুরোফোর সরাসরি প্রাথমিক অ্যান্টিবডির সাথে সংযুক্ত হয় যখন পরোক্ষ ইমিউনোফ্লোরেসেন্সে, ফ্লুরোফোর সেকেন্ডারি অ্যান্টিবডির সাথে সংযুক্ত হয়।
ডাইরেক্ট ইমিউনোফ্লোরেসেন্স কি?
ইমিউনোফ্লোরেসেন্স নির্দিষ্ট লক্ষ্য অ্যান্টিজেন সনাক্ত করতে অ্যান্টিবডি ব্যবহার করে। ডাইরেক্ট ইমিউনোফ্লুরেসেন্স হল দুই ধরনের ইমিউনোফ্লুরেসেন্সের মধ্যে একটি। সরাসরি ইমিউনোফ্লোরোসেন্সে, একটি একক অ্যান্টিবডি (প্রাথমিক অ্যান্টিবডি) জড়িত থাকে এবং ফ্লুরোফোর সরাসরি প্রাথমিক অ্যান্টিবডির সাথে সংযুক্ত হয়। অ্যান্টিবডিকে লক্ষ্য অ্যান্টিজেনের সাথে আবদ্ধ করার পরে, ফ্লুরোফোর ফ্লুরোসেন্স নির্গত করে যা একটি ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপ দ্বারা সনাক্ত করা যেতে পারে।
চিত্র 01: সরাসরি ইমিউনোফ্লোরেসেন্স
তবে, সরাসরি ইমিউনোফ্লোরেসেন্স একটি ব্যয়বহুল পদ্ধতি কারণ প্রাথমিক সংযোজিত অ্যান্টিবডিগুলি সেকেন্ডারি অ্যান্টিবডিগুলির তুলনায় ব্যয়বহুল। তবুও, এটি একটি অতিরিক্ত পদক্ষেপ জড়িত নয়, একটি ছোট কৌশল। তদ্ব্যতীত, অ-নির্দিষ্ট বাইন্ডিংগুলি সরাসরি ইমিউনোফ্লোরোসেন্সে হ্রাস পায়। তাই, প্রজাতির ক্রস-প্রতিক্রিয়াশীলতা কম। কিন্তু সনাক্তকরণের ক্ষেত্রে, প্রত্যক্ষ ইমিউনোফ্লুরোসেন্সের সংবেদনশীলতা পরোক্ষ ইমিউনোফ্লোরোসেন্সের তুলনায় দুর্বল।
পরোক্ষ ইমিউনোফ্লুরোসেন্স কি?
পরোক্ষ ইমিউনোফ্লোরোসেন্স হল দ্বিতীয় ধরণের ইমিউনোফ্লোরেসেন্স যা লক্ষ্য অ্যান্টিজেনের লেবেলিংয়ের ক্ষেত্রে প্রাথমিক এবং মাধ্যমিক অ্যান্টিবডিগুলির মতো দুটি ধরণের অ্যান্টিবডি জড়িত।এই পদ্ধতিতে, ফ্লুরোফোর সেকেন্ডারি অ্যান্টিবডির সাথে মিলিত হয়। তাই, এই কৌশলটি একটি অতিরিক্ত পদক্ষেপ জড়িত৷
চিত্র 02: ইমিউনোফ্লোরেসেন্স
তবে, এই পদ্ধতিতে সংবেদনশীলতা বেশি কারণ বেশ কিছু ফ্লুরোফোর সেকেন্ডারি অ্যান্টিবডিতে সংযোজিত হতে পারে এবং এটি সনাক্তকরণকে সহজ করে তোলে। তদুপরি, পরোক্ষ ইমিউনোফ্লোরেসেন্স কম ব্যয়বহুল কারণ সেকেন্ডারি অ্যান্টিবডিগুলির সংমিশ্রণ কম ব্যয়বহুল এবং সহজ। প্রত্যক্ষ ইমিউনোফ্লোরোসেন্সের তুলনায়, পরোক্ষ পদ্ধতিতে প্রজাতির ক্রস-প্রতিক্রিয়াশীলতা বেশি।
প্রত্যক্ষ এবং পরোক্ষ ইমিউনোফ্লোরোসেন্সের মধ্যে মিল কী?
- এগুলো দুই ধরনের ইমিউনোফ্লোরেসেন্স টেকনিক।
- প্রাথমিক অ্যান্টিবডি এবং ফ্লুরোফোর উভয় পদ্ধতিতে জড়িত।
- এছাড়াও, অ্যান্টিজেন-অ্যান্টিবডি বিক্রিয়া উভয় পদ্ধতিতেই ঘটে।
- এছাড়াও, প্রত্যক্ষ এবং পরোক্ষ উভয় ইমিউনোফ্লোরোসেন্স অ্যান্টিজেন সনাক্তকরণের জন্য একটি ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপ ব্যবহার করে।
প্রত্যক্ষ এবং পরোক্ষ ইমিউনোফ্লুরোসেন্সের মধ্যে পার্থক্য কী?
ইমিউনোফ্লোরেসেন্স ব্যবহৃত অ্যান্টিবডিগুলির সাথে ফ্লুরোফোর সংযোজনের উপর ভিত্তি করে প্রত্যক্ষ বা পরোক্ষ হতে পারে। প্রত্যক্ষ ইমিউনোফ্লোরোসেন্সে, ফ্লুরোফোর প্রাথমিক অ্যান্টিবডির সাথে মিলিত হয়, যা এই প্রযুক্তিতে জড়িত একক অ্যান্টিবডি। এর বিপরীতে, পরোক্ষ ইমিউনোফ্লোরোসেন্সে, ফ্লুরোফোর সেকেন্ডারি অ্যান্টিবডির সাথে মিলিত হয়, যা কৌশলটির সাথে জড়িত দুটি ধরণের অ্যান্টিবডিগুলির মধ্যে একটি। সুতরাং, প্রত্যক্ষ এবং পরোক্ষ ইমিউনোফ্লোরেসেন্সের মধ্যে প্রধান পার্থক্য হল অ্যান্টিবডি টাইপ যা ফ্লুরোফোরের সাথে সংযুক্ত হয়।
নিম্নলিখিত ইনফোগ্রাফিক প্রত্যক্ষ এবং পরোক্ষ ইমিউনোফ্লুরোসেন্সের মধ্যে পার্থক্যের পাশাপাশি তুলনা প্রদান করে।
সারাংশ - প্রত্যক্ষ বনাম পরোক্ষ ইমিউনোফ্লুরেসেন্স
ইমিউনোফ্লোরেসেন্স হল একটি কৌশল যা একটি নমুনায় নির্দিষ্ট অ্যান্টিজেনের উপস্থিতি সনাক্ত করতে ব্যবহৃত হয়। এই কৌশলটি নির্দিষ্ট অ্যান্টিবডি ব্যবহার করে। অতএব, এতে, অ্যান্টিবডিগুলি ফ্লুরোফোরসের সাথে মিলিত হয় এবং ফ্লুরোসেন্ট মাইক্রোস্কোপ ব্যবহার করে তাদের সনাক্ত করে। তদুপরি, দুটি ধরণের ইমিউনোফ্লোরেসেন্স রয়েছে যথা, প্রত্যক্ষ এবং পরোক্ষ ইমিউনোফ্লোরেসেন্স। ডাইরেক্ট ইমিউনোফ্লোরেসেন্স একটি একক অ্যান্টিবডি এবং ফ্লুরোফোর সরাসরি এই অ্যান্টিবডির সাথে সংযুক্ত থাকে। পরোক্ষ ইমিউনোফ্লুরেসেন্স দুটি অ্যান্টিবডি জড়িত; প্রাথমিক এবং মাধ্যমিক এবং ফ্লুরোফোর সেকেন্ডারি অ্যান্টিবডিতে সংযুক্ত।যেহেতু বেশ কিছু সেকেন্ডারি অ্যান্টিবডি একটি প্রাথমিক অ্যান্টিবডির সঙ্গে আবদ্ধ হতে পারে এবং বেশ কিছু ফ্লুরোফোর সেকেন্ডারি অ্যান্টিবডির সঙ্গে মিলিত হতে পারে, তাই পরোক্ষ ইমিউনোফ্লোরেসেন্স প্রত্যক্ষ পদ্ধতির চেয়ে বেশি সংবেদনশীল পদ্ধতি। অধিকন্তু, পরোক্ষ পদ্ধতিটি প্রত্যক্ষ পদ্ধতির চেয়ে কম ব্যয়বহুল। সুতরাং, এটি প্রত্যক্ষ এবং পরোক্ষ ইমিউনোফ্লুরেসেন্সের মধ্যে পার্থক্য।
