প্রচলিত নেস্টেড এবং রিয়েল-টাইম পিসিআর অ্যাসেসের মধ্যে মূল পার্থক্য হল যে প্রচলিত পিসিআর হল একটি কৌশল যা ডিএনএ-র নির্দিষ্ট ক্রমগুলিকে প্রশস্ত করার জন্য তৈরি করা হয়েছে এবং নেস্টেড পিসিআর হল প্রচলিত পিসিআর-এর একটি পরিবর্তন যা দুটি অনুক্রমিক পরিবর্ধন প্রতিক্রিয়া নিয়ে গঠিত, যখন বাস্তব -টাইম পিসিআর হল প্রচলিত পিসিআরের একটি রূপ যা পরিবর্ধিত পণ্যের পরিমাণ নির্ধারণ করতে সক্ষম।
পিসিআর একটি খুব সাধারণ বৈজ্ঞানিক কৌশল যা ডিএনএ সনাক্ত করতে গবেষণা এবং ওষুধে ব্যাপকভাবে ব্যবহৃত হয়। পিসিআর পরীক্ষাগুলি তাদের ডিএনএ বা আরএনএ সনাক্ত করে অ্যান্টিজেন সনাক্ত করতে ব্যবহৃত হয়। সাধারণত, অ্যান্টিবডি সনাক্তকরণ বা রোগের লক্ষণগুলি প্রদর্শন করার আগে ভাইরাল আরএনএ শরীরে উপস্থিত থাকে।একটি পিসিআর পরীক্ষা প্রথম দিকে কারো ভাইরাস আছে কি না তা বলতে পারে। বর্তমানে, পিসিআর হল COVID-19 রোগ শনাক্ত করার জন্য আদর্শ পরীক্ষা। বিভিন্ন ধরনের পিসিআর কৌশল রয়েছে যেমন রিয়েল-টাইম পিসিআর, নেস্টেড পিসিআর, মাল্টিপ্লেক্স পিসিআর, হট স্টার্ট পিসিআর এবং লং-রেঞ্জ পিসিআর ইত্যাদি।
প্রচলিত পিসিআর অ্যাসেস কি?
প্রচলিত পিসিআর অ্যাস হল একটি ইন ভিট্রো ডিএনএ পরিবর্ধন কৌশল যা নিয়মিতভাবে আণবিক জৈবিক পরীক্ষাগারে সম্পাদিত হয়। এই পদ্ধতিটি একটি নির্দিষ্ট ডিএনএ খণ্ডের হাজার হাজার থেকে লক্ষ লক্ষ কপি তৈরি করতে সক্ষম করে। ক্যারি মুলিস 1980 সালে এই কৌশলটি চালু করেছিলেন। এই কৌশলটির অনেকগুলি অনুলিপি তৈরি করার জন্য টেমপ্লেট হিসাবে পরিচিত একটি ডিএনএ খণ্ডের প্রয়োজন হয়। Taq পলিমারেজ ডিএনএ পলিমারেজ এনজাইম হিসাবে কাজ করে এবং টেমপ্লেট সিকোয়েন্সের নতুন স্ট্র্যান্ডের সংশ্লেষণকে অনুঘটক করে।
পিসিআর মিশ্রণে প্রাইমারগুলি খণ্ডের এক্সটেনশনের শুরুর পয়েন্ট হিসাবে কাজ করবে। ডিএনএ-এর কপি তৈরির জন্য প্রয়োজনীয় সমস্ত উপাদান পিসিআর মিশ্রণে অন্তর্ভুক্ত।পিসিআর প্রতিক্রিয়া একটি পিসিআর মেশিনে চালানো হয় এবং এটি সঠিক পিসিআর মিশ্রণ এবং সঠিক পিসিআর প্রোগ্রামের সাথে খাওয়ানো উচিত। প্রতিক্রিয়া মিশ্রণ এবং প্রোগ্রাম সঠিক হলে, এটি খুব অল্প পরিমাণ ডিএনএ থেকে ডিএনএর একটি নির্দিষ্ট অংশের প্রয়োজনীয় সংখ্যক কপি তৈরি করবে।
চিত্র 01: প্রচলিত পিসিআর পরীক্ষা
পিসিআর প্রতিক্রিয়ায় তিনটি প্রধান ধাপ জড়িত: বিকৃতকরণ, প্রাইমার অ্যানিলিং এবং স্ট্র্যান্ড এক্সটেনশন। এই তিনটি ধাপ তিনটি ভিন্ন তাপমাত্রায় ঘটে। PCR বাফার Taq পলিমারেজ কর্মের জন্য সর্বোত্তম অবস্থা বজায় রাখে। পিসিআর বিক্রিয়ার এই তিনটি পর্যায় পিসিআর পণ্যের প্রয়োজনীয় পরিমাণ উত্পাদন করতে পুনরাবৃত্তি হয়। প্রতিটি পিসিআর প্রতিক্রিয়ায়, ডিএনএ কপির সংখ্যা দ্বিগুণ হয়।সুতরাং, PCR-তে সূচকীয় পরিবর্ধন লক্ষ্য করা যেতে পারে। জেল ইলেক্ট্রোফোরেসিস ব্যবহার করে পিসিআর পণ্যটি সমাধান করা যেতে পারে কারণ এটি একটি জেলে দৃশ্যমান পরিমাণে ডিএনএ তৈরি করে এবং এটি সিকোয়েন্সিংয়ের মতো আরও গবেষণার জন্য বিশুদ্ধ করা যেতে পারে।
PCR চিকিৎসা ও জৈবিক গবেষণায় একটি মূল্যবান হাতিয়ার। বিশেষ করে ফরেনসিক স্টাডিতে, পিসিআর-এর একটি অপরিসীম মূল্য রয়েছে কারণ এটি অপরাধীদের ক্ষুদ্র নমুনা থেকে অধ্যয়নের জন্য ডিএনএ প্রশস্ত করতে পারে এবং ফরেনসিক ডিএনএ প্রোফাইল তৈরি করতে পারে। জিনোটাইপিং, জিন ক্লোনিং, মিউটেশন সনাক্তকরণ, ডিএনএ সিকোয়েন্সিং, ডিএনএ মাইক্রোয়ারে এবং পিতৃত্ব পরীক্ষা সহ আণবিক জীববিজ্ঞানের অনেক ক্ষেত্রে পিসিআর ব্যাপকভাবে ব্যবহৃত হয়।
নেস্টেড পিসিআর অ্যাসেস কী?
নেস্টেড পিসিআর হল এক ধরনের পিসিআর যা ডিএনএর অ-নির্দিষ্ট পরিবর্ধন হ্রাস করে। নেস্টেড পিসিআর অ্যাসেতে দুটি ধারাবাহিক পিসিআর বা দুটি অনুক্রমিক পরিবর্ধন প্রতিক্রিয়া রয়েছে। প্রথম পরিবর্ধন প্রতিক্রিয়ার সময়, একটি পিসিআর পণ্য উত্পাদিত হয়। প্রথম প্রতিক্রিয়ার পরে, প্রথম প্রতিক্রিয়ার পিসিআর পণ্যে একটি দ্বিতীয় পরিবর্ধন প্রতিক্রিয়া সঞ্চালিত হয়।অতএব, দ্বিতীয় বিক্রিয়া মিশ্রণের প্রাইমারগুলি প্রথম পিসিআর পণ্যের সাথে আবদ্ধ হয় এবং এটিকে প্রশস্ত করে।
চিত্র 02: নেস্টেড পিসিআর
প্রাইমার জোড়া প্রতিটি বিক্রিয়ায় আলাদা। প্রাইমারগুলির অ-নির্দিষ্ট বাঁধাই নেস্টেড পিসিআর-এ হ্রাস করা হয়। নেস্টেড পিসিআর অ্যাসগুলি সংবেদনশীলতা এবং/অথবা নির্দিষ্টতা বাড়াতে কার্যকর। যাইহোক, নেস্টেড পিসিআর-এর জন্য আগ্রহী ক্রম সম্পর্কে জ্ঞান প্রয়োজন।
রিয়েল-টাইম পিসিআর অ্যাসেস কী?
রিয়েল-টাইম PCR বা পরিমাণগত PCR (Q PCR) হল PCR-এর একটি পরিবর্তিত সংস্করণ যা PCR পণ্যগুলিকে পরিমাণগতভাবে পরিমাপ করে। অতএব, এই কৌশলটি একটি রিয়েল-টাইম পিসিআর মেশিন ব্যবহার করে রিয়েল-টাইমে পরিবর্ধনের পরিমাণ নির্ধারণ করে। এটি একটি নমুনায় উপস্থিত একটি লক্ষ্য ক্রম বা জিনের পরিমাণ নির্ধারণের জন্য একটি উপযুক্ত পদ্ধতি।
রিয়েল-টাইম পিসিআর-এর আকর্ষণীয় বৈশিষ্ট্য হল এটি একটি একক ধাপে পরিবর্ধন এবং প্রকৃত পরিমাণ উভয়কে একত্রিত করে। অতএব, সনাক্তকরণের জন্য জেল ইলেক্ট্রোফোরসিসের প্রয়োজনীয়তা রিয়েল-টাইম পিসিআর কৌশল দ্বারা নির্মূল করা যেতে পারে। পিসিআর প্রতিক্রিয়াগুলির সময় পিসিআর পণ্যগুলিকে লেবেল করার জন্য ফ্লুরোসেন্ট রঞ্জকগুলির ব্যবহার অবশেষে সরাসরি পরিমাণ নির্ধারণের দিকে পরিচালিত করবে। যখন পিসিআর পণ্যগুলি জমা হয়, তখন ফ্লুরোসেন্ট সংকেতগুলিও জমা হয় এবং সেগুলি রিয়েল-টাইম মেশিন দ্বারা পরিমাপ করা হবে। রিয়েল-টাইম পিসিআর-এর পরিবর্ধন প্রক্রিয়া সনাক্ত বা দেখার জন্য SYBR গ্রীন এবং তাকমান দুটি পদ্ধতি। উভয় পদ্ধতিই পরিবর্ধন প্রক্রিয়ার অগ্রগতি নিরীক্ষণ করে এবং রিয়েল-টাইমে পণ্যের পরিমাণ রিপোর্ট করে।
চিত্র 03: রিয়েল-টাইম PCR
রিয়েল-টাইম পিসিআর-এর বিভিন্ন ধরনের অ্যাপ্লিকেশন রয়েছে যেমন জিন এক্সপ্রেশন কোয়ান্টিফিকেশন, মাইক্রোআরএনএ এবং নন-কোডিং আরএনএ বিশ্লেষণ, এসএনপি জিনোটাইপিং, অনুলিপি নম্বর বৈকল্পিক সনাক্তকরণ, বিরল মিউটেশন সনাক্তকরণ, জেনেটিকালি পরিবর্তিত জীবের সনাক্তকরণ এবং সংক্রামক এজেন্ট সনাক্তকরণ।
প্রচলিত নেস্টেড এবং রিয়েল-টাইম পিসিআর অ্যাসেসের মধ্যে মিল কী?
- নেস্টেড এবং রিয়েল-টাইম পিসিআর অ্যাসেগুলি হল প্রচলিত পিসিআর অ্যাসের পরিবর্তন৷
- তিনটি কৌশলই ডিএনএ নমুনাকে প্রশস্ত করে।
- তাদের পণ্যগুলি সিকোয়েন্সিং বা বিশ্লেষণে ব্যবহার করা যেতে পারে।
- এই অ্যাসেসের জন্য প্রাইমার প্রয়োজন।
প্রচলিত নেস্টেড এবং রিয়েল-টাইম পিসিআর অ্যাসেসের মধ্যে পার্থক্য কী?
প্রচলিত পিসিআর হল একটি কৌশল যা ডিএনএ-এর নির্দিষ্ট ক্রমকে প্রসারিত করার জন্য তৈরি করা হয়েছে। এদিকে, নেস্টেড পিসিআর হল প্রচলিত পিসিআর-এর একটি পরিবর্তন যা দুটি অনুক্রমিক পরিবর্ধন প্রতিক্রিয়া নিয়ে গঠিত, এবং রিয়েল-টাইম পিসিআর হল প্রচলিত পিসিআর-এর একটি রূপ যা পরিবর্ধিত পণ্যের পরিমাণ নির্ধারণ করতে সক্ষম।সুতরাং, এটি প্রচলিত নেস্টেড এবং রিয়েল-টাইম পিসিআর অ্যাসেসের মধ্যে মূল পার্থক্য। প্রচলিত এবং রিয়েল-টাইম পিসিআর থেকে ভিন্ন, নেস্টেড পিসিআর দুটি প্রাইমার সেট ব্যবহার করে। অধিকন্তু, অ-নির্দিষ্ট পরিবর্ধন হ্রাস করার জন্য নেস্টেড পিসিআর-এ দুটি ধারাবাহিক পরিবর্ধন প্রতিক্রিয়া রয়েছে। এছাড়াও, প্রচলিত এবং রিয়েল-টাইম পিসিআর অ্যাসে দুটি অনুক্রমিক পরিবর্ধন প্রতিক্রিয়া ধারণ করে না।
নিম্নলিখিত ইনফোগ্রাফিকগুলি পাশাপাশি তুলনার জন্য সারণী আকারে প্রচলিত নেস্টেড এবং রিয়েল-টাইম পিসিআর অ্যাসেসের মধ্যে পার্থক্যগুলি তালিকাভুক্ত করে৷
সারাংশ – প্রচলিত বনাম নেস্টেড বনাম রিয়েল-টাইম পিসিআর অ্যাসেস
প্রচলিত পিসিআর হল প্রথম কৌশল যা ডিএনএ-এর নির্দিষ্ট অংশগুলিকে প্রসারিত করার জন্য তৈরি করা হয়েছে। নেস্টেড পিসিআর এবং রিয়েল-টাইম পিসিআর হল প্রচলিত পিসিআর-এর দুটি রূপ। নেস্টেড পিসিআর-এ দুটি অনুক্রমিক পরিবর্ধন প্রতিক্রিয়া এবং দুটি প্রাইমার সেটের ব্যবহার রয়েছে। পরিবর্ধিত পিসিআর পণ্যের পরিমাণ নির্ধারণের জন্য রিয়েল-টাইম পিসিআর তৈরি করা হয়েছে। সুতরাং, এটি প্রচলিত নেস্টেড এবং রিয়েল-টাইম পিসিআর অ্যাসেসের মধ্যে পার্থক্যকে সংক্ষিপ্ত করে।
