নিক ট্রান্সলেশন এবং এন্ড ফিলিং এর মধ্যে মূল পার্থক্য হল নিক ট্রান্সলেশন হল এমন একটি প্রক্রিয়া যা বিভিন্ন হাইব্রিডাইজেশন প্রতিক্রিয়ার জন্য লেবেলযুক্ত ডিএনএ প্রোব তৈরি করে যখন এন্ড ফিলিং এমন একটি কৌশল যা একক-স্ট্রেন্ডেড ওভারহ্যাংগুলিতে নিউক্লিওটাইডগুলি যুক্ত করে ভোঁতা টুকরা তৈরি করে৷
নিক ট্রান্সলেশন এবং এন্ড ফিলিং হল আণবিক জীববিজ্ঞানে ব্যবহৃত দুটি কৌশল। নির্দিষ্ট নিউক্লিওটাইড সিকোয়েন্স সনাক্ত করার জন্য সংকরকরণের জন্য প্রোবের লেবেল করার জন্য নিক অনুবাদ ব্যবহার করা হয়। এন্ড ফিলিং ব্যবহার করা হয় ভোঁতা টুকরো তৈরি করতে যার শেষ প্রান্তে একক-স্ট্রেন্ডেড ওভারহ্যাং রয়েছে। উভয় কৌশলেরই অত্যন্ত গুরুত্ব রয়েছে এবং এগুলি নিয়মিতভাবে আণবিক গবেষণা ল্যাবে সঞ্চালিত হয়।
নিক অনুবাদ কি?
নিক অনুবাদ হল একটি গুরুত্বপূর্ণ কৌশল যা বিভিন্ন আণবিক জৈবিক কৌশল যেমন ব্লটিং, ইন সিটু হাইব্রিডাইজেশন, সিটু হাইব্রিডাইজেশনে ফ্লুরোসেন্ট ইত্যাদির জন্য লেবেলযুক্ত প্রোব প্রস্তুত করতে ব্যবহৃত হয়। এটি ডিএনএ লেবেলিংয়ের একটি ইন ভিট্রো পদ্ধতি। ডিএনএ প্রোবগুলি নির্দিষ্ট ডিএনএ বা আরএনএ সিকোয়েন্স সনাক্ত করতে ব্যবহৃত হয়। একটি লেবেলযুক্ত প্রোবের সাহায্যে, নিউক্লিক অ্যাসিডের জটিল মিশ্রণ থেকে নির্দিষ্ট টুকরোগুলি চিহ্নিত বা কল্পনা করা যেতে পারে। তাই লেবেলযুক্ত প্রোবগুলি বিভিন্ন কৌশল ব্যবহার করে প্রস্তুত করা হয়। নিক ট্রান্সলেশন এমনই একটি পদ্ধতি যা DNase 1 এবং DNA পলিমারেজ 1 এনজাইমের সাহায্যে লেবেলযুক্ত প্রোব তৈরি করে৷
চিত্র 01: নিক অনুবাদ
নিক অনুবাদ প্রক্রিয়া DNase 1 এনজাইম কার্যকলাপের সাথে শুরু হয়।DNase 1 নিউক্লিওটাইডের মধ্যে ফসফোডিস্টার বন্ধন ছিন্ন করার মাধ্যমে ডবল-স্ট্র্যান্ডেড ডিএনএর ফসফেট মেরুদণ্ডের সাথে নিক্সের পরিচয় দেয়। একবার নিক তৈরি হয়ে গেলে, নিউক্লিওটাইডের বিনামূল্যে 3′ OH গ্রুপ তৈরি হবে এবং DNA পলিমারেজ 1 এনজাইম এটিতে কাজ করবে। ডিএনএ পলিমারেজ 1 এর 5′ থেকে 3′ এক্সোনিউক্লিজ ক্রিয়াকলাপ নিক থেকে ডিএনএ স্ট্র্যান্ডের 3′ দিকের দিকে নিউক্লিওটাইডগুলি সরিয়ে দেয়৷
একসাথে, ডিএনএ পলিমারেজ 1 এনজাইমের পলিমারেজ কার্যকলাপ কাজ করে এবং অপসারণ নিউক্লিওটাইডগুলিকে প্রতিস্থাপন করতে নিউক্লিওটাইড যোগ করে। যদি নিউক্লিওটাইডগুলি লেবেলযুক্ত থাকে, তবে প্রতিস্থাপনটি লেবেলযুক্ত নিউক্লিওটাইড দ্বারা ঘটবে এবং এটি সনাক্তকরণের জন্য ডিএনএ চিহ্নিত করবে। অবশেষে, এই সদ্য সংশ্লেষিত লেবেলযুক্ত ডিএনএ বিভিন্ন সংকরায়ন প্রতিক্রিয়ায় প্রোব হিসাবে ব্যবহার করা যেতে পারে।
এন্ড ফিলিং কি?
এন্ড ফিলিং হল একটি কৌশল যা আণবিক জীববিজ্ঞানে ভোঁতা টুকরা তৈরি করতে ব্যবহৃত হয়। সীমাবদ্ধ হজম overhangs সঙ্গে টুকরা উত্পাদন। এই টুকরোগুলো প্লাজমিড ভেক্টরের সাথে লিগেট করার জন্য সামঞ্জস্যপূর্ণ নাও হতে পারে।ভেক্টরগুলি প্রায়শই অসঙ্গত প্রান্তগুলিকে যুক্ত করার অনুমতি দেওয়ার জন্য ভোঁতা হয়। অতএব, পলিমারাইজেশনের জন্য টেমপ্লেট হিসাবে ওভারহ্যাং ব্যবহার করে পরিপূরক স্ট্র্যান্ডে নিউক্লিওটাইড যুক্ত করে ওভারহ্যাং সহ খণ্ডগুলিকে ভোঁতা করা যেতে পারে। এই প্রক্রিয়াটি শেষ ফিলিং হিসাবে পরিচিত৷
DNA পলিমারেজ যেমন DNA পলিমারেজ I এর Klenow খণ্ড এবং T4 DNA পলিমারেজ শেষ ফিলিংকে অনুঘটক করে। তারা (5′ → 3′) পূরণ করতে নিউক্লিওটাইড যোগ করে এবং ফিরে চিবিয়ে (3′ → 5′)। একবার আঠালো প্রান্তগুলি পূর্ণ হয়ে গেলে, তারা ভোঁতা হয়ে যায় এবং তারা একটি ভেক্টরে আটকে যাওয়ার জন্য প্রস্তুত হয়৷
উপরন্তু, শেষ ফিলিং ডিএনএ অণু লেবেল করতে ব্যবহার করা যেতে পারে। যাইহোক, এটি শুধুমাত্র স্টিকি প্রান্ত সহ ডিএনএ অণু লেবেল করতে ব্যবহার করা যেতে পারে। নিক ট্রান্সলেশনের তুলনায়, এন্ড ফিলিং একটি মৃদু পদ্ধতি যা খুব কমই ডিএনএ ব্রেক ঘটায়।
নিক অনুবাদ এবং শেষ ভরাটের মধ্যে মিল কী?
- নিক অনুবাদ এবং শেষ ফিলিং উভয়ই আণবিক জৈবিক কৌশল।
- এগুলি প্রোব লেবেল করতে ব্যবহার করা যেতে পারে।
- দুজনেই ভিট্রোতে
নিক অনুবাদ এবং শেষ পূরণের মধ্যে পার্থক্য কী?
নিক অনুবাদ হল একটি কৌশল যা হাইব্রিডাইজেশনের জন্য লেবেলযুক্ত প্রোব তৈরি করে। বিপরীতে, শেষ ভরাট এমন একটি কৌশল যা ভেক্টরগুলিতে বন্ধনের জন্য ভোঁতা টুকরো তৈরি করে। সুতরাং, এটি নিক অনুবাদ এবং শেষ ভরাটের মধ্যে মূল পার্থক্য। তদুপরি, নিক অনুবাদের জন্য 5’ থেকে 3′ এক্সোনিউক্লিজ অ্যাক্টিভিটি ব্যবহার করা প্রয়োজন যেখানে শেষ ফিলিং-এর জন্য 5’ থেকে 3′ এক্সনোক্লিজ অ্যাক্টিভিটি প্রয়োজন হয় না।
নীচের ইনফোগ্রাফিকটি নিক ট্রান্সলেশন এবং শেষ ফিলিং এর মধ্যে পার্থক্যগুলিকে আরও বিস্তারিতভাবে সারণী করে৷
সারাংশ – নিক ট্রান্সলেশন বনাম এন্ড ফিলিং
নিক অনুবাদ হল একটি পদ্ধতি যা ডিএনএ-তে রেডিওলেবেলযুক্ত নিউক্লিওটাইডগুলিকে অন্তর্ভুক্ত করে। এটি DNase 1 এবং E. coli DNA পলিমারেজ 1 এনজাইমের কার্যকলাপের উপর ভিত্তি করে লেবেলযুক্ত প্রোবগুলিকে সংশ্লেষিত করে। অন্যদিকে, শেষ ভরাট একটি কৌশল যা ভোঁতা টুকরা তৈরি করে। যখন টুকরোগুলির আঠালো প্রান্ত থাকে (একক-স্ট্র্যান্ডেড ওভারহ্যাং), তখন ভেক্টরগুলিতে লিগেট করার জন্য তাদের ভোঁতা প্রান্ত তৈরি করা প্রয়োজন। এন্ড ফিলিং সামঞ্জস্যপূর্ণ নিউক্লিওটাইড যোগ করে এবং বন্ধনের জন্য সামঞ্জস্যপূর্ণ করার জন্য ভোঁতা শেষ টুকরো তৈরি করে। এইভাবে, এটি নিক অনুবাদ এবং শেষ ভরাটের মধ্যে পার্থক্যকে সংক্ষিপ্ত করে৷
