RP HPLC এবং HIC-এর মধ্যে মূল পার্থক্য হল যে RP HPLC বেশি পোলার মোবাইল ফেজ এবং কম মেরু স্থির ফেজ ব্যবহার করে। যেখানে, HIC একটি হাইড্রোফোবিক স্থির ফেজ ব্যবহার করে যা হাইড্রোফোবিক অণুগুলিকে এটির সাথে সংযুক্ত করতে দেয়৷
ক্রোমাটোগ্রাফি একটি বিশ্লেষণাত্মক কৌশল যা একটি মিশ্রণকে এর উপাদানগুলির মধ্যে আলাদা করতে সাহায্য করে। প্রথমত, আমাদের নমুনাটিকে দ্রবীভূত করে দ্রবণে আলাদা করতে হবে। এই দ্রবণ-পদার্থের মিশ্রণকে মোবাইল ফেজ বলা হয়। তারপর মোবাইল ফেজটি স্টেশনারী ফেজ নামে আরেকটি উপাদানের মধ্য দিয়ে যায়। স্থির পর্যায় উপাদানগুলির বিচ্ছেদ নির্ধারণ করে। মোবাইল ফেজ এবং স্থির পর্যায়ের মধ্যে উপাদানের বিভাজনের কারণে বিচ্ছেদ ঘটে।
RP HPLC কি?
RP HPLC শব্দটি রিভার্স ফেজ হাই-পারফরমেন্স লিকুইড ক্রোমাটোগ্রাফির জন্য দাঁড়িয়েছে। এটি হাইড্রোফোবিসিটি অনুসারে একটি মিশ্রণে উপাদানগুলির বিচ্ছেদ জড়িত। মোবাইল ফেজের হাইড্রোফোবিক উপাদানগুলি স্থির পর্যায়ে স্থির হাইড্রোফোবিক লিগান্ডের সাথে সংযোগ করে, যখন হাইড্রোফিলিক উপাদানগুলি স্থির পর্যায়ের পৃষ্ঠের সাথে সংযুক্ত না হয়ে স্থির পর্যায়ের মধ্য দিয়ে বেরিয়ে যায়।
চিত্র 01: HPLC যন্ত্রপাতি
এছাড়া, অন্যান্য ক্রোমাটোগ্রাফিক কৌশলগুলির তুলনায় এই পদ্ধতির আরও বেশি প্রজননযোগ্যতা রয়েছে এবং এটি ব্যাপক প্রযোজ্যতাও দেখায়। অতএব, আমরা সমস্ত HPLC পদ্ধতির 75% এর জন্য পরীক্ষাগারে এই পদ্ধতিটি ব্যবহার করি। বেশিরভাগ সময়, আমরা মোবাইল ফেজ হিসাবে একটি মিসসিবল পোলার জৈব দ্রাবকের সাথে জলের একটি জলীয় মিশ্রণ ব্যবহার করি।এইভাবে, এটি স্থির পর্যায়ের পৃষ্ঠের দ্রবণে হাইড্রোফোবিক উপাদানগুলির সংযুক্তি নিশ্চিত করবে৷
HIC কি?
এইচআইসি শব্দটি হাইড্রোফোবিক মিথস্ক্রিয়া ক্রোমাটোগ্রাফির জন্য দাঁড়িয়েছে। এটি এক ধরনের বিপরীত ফেজ HPLC, এবং এই পদ্ধতিটি প্রধানত প্রোটিনের মতো বৃহৎ জৈব অণুকে আলাদা করার জন্য ব্যবহৃত হয়। এই পদ্ধতিতে, বায়োমোলিকুলের নমুনা তৈরি করতে আমাদের একটি জলীয় মাধ্যম ব্যবহার করতে হবে। কারণ জৈব দ্রাবক প্রোটিনকে বিকৃত করতে পারে। অধিকন্তু, এই কৌশলটি স্থির পর্যায়ের সামান্য হাইড্রোফোবিক পৃষ্ঠের সাথে বড় অণুর মধ্যে মিথস্ক্রিয়া ব্যবহার করে। উপরন্তু, আমাদের নমুনায় উচ্চ লবণের ঘনত্ব ব্যবহার করতে হবে কারণ এটি প্যাকিংয়ে প্রোটিন ধরে রাখতে উৎসাহিত করে; এই প্রক্রিয়াটিকে সল্টিং আউট বলা হয়। লবণের ঘনত্ব ধীরে ধীরে হ্রাস করে, আমরা জৈব অণুগুলিকে তাদের হাইড্রোফোবিসিটি অনুসারে আলাদাভাবে ইলুট করতে পারি।
সাধারণত, এই পদ্ধতিটি আয়ন-বিনিময় ক্রোমাটোগ্রাফির বিপরীত শর্তগুলি ব্যবহার করে।এই কৌশলটিতে, প্রথমে, নমুনায় দ্রবণের দ্রবণ কমানোর জন্য আমাদের কলামের মধ্য দিয়ে একটি বাফার সমাধান পাস করতে হবে। এটি প্রোটিনের হাইড্রোফোবিক অঞ্চলগুলিকে উন্মুক্ত করে তোলে। যাইহোক, যখন অণু বেশি হাইড্রোফোবিক হয়, তখন বাঁধাইকে উন্নীত করার জন্য কম লবণের প্রয়োজন হয়। এখানে, কম হাইড্রোফোবিক দ্রবণগুলিকে প্রথমে বিলুপ্ত করা হয় এবং লবণের ঘনত্বের পরিবর্তন অনুসারে, আরও হাইড্রোফোবিক দ্রবণগুলি শেষ পর্যন্ত নির্গত হয়৷
RP HPLC এবং HIC-এর মধ্যে পার্থক্য কী?
ক্রোমাটোগ্রাফি একটি মিশ্রণে উপাদানগুলিকে পৃথক করার জন্য একটি বিশ্লেষণাত্মক কৌশল। RP HPLC এবং HIC দুটি বিশেষ ক্রোমাটোগ্রাফিক কৌশল। RP HPLC এবং HIC-এর মধ্যে মূল পার্থক্য হল যে RP HPLC একটি বেশি পোলার মোবাইল ফেজ এবং কম পোলার স্থির ফেজ ব্যবহার করে, যেখানে HIC একটি হাইড্রোফোবিক স্থির ফেজ ব্যবহার করে, যা হাইড্রোফোবিক অণুগুলিকে এটির সাথে সংযুক্ত করতে দেয়৷
নীচের ইনফোগ্রাফিকটি RP HPLC এবং HIC-এর মধ্যে পার্থক্য সংক্ষিপ্ত করে৷
সারাংশ – RP HPLC বনাম HIC
ক্রোমাটোগ্রাফি একটি মিশ্রণে উপাদানগুলিকে পৃথক করার জন্য একটি বিশ্লেষণাত্মক কৌশল। RP HPLC এবং HIC দুটি বিশেষ ক্রোমাটোগ্রাফিক কৌশল। আরপি এইচপিএলসি এবং এইচআইসির মধ্যে মূল পার্থক্য হল যে আরপি এইচপিএলসি একটি বেশি পোলার মোবাইল ফেজ এবং একটি কম পোলার স্থির ফেজ ব্যবহার করে, যেখানে এইচআইসি একটি হাইড্রোফোবিক স্থির ফেজ ব্যবহার করে, যা হাইড্রোফোবিক অণুগুলিকে এটির সাথে সংযুক্ত করতে দেয়৷
