ক্লোন দ্বারা ক্লোন সিকোয়েন্সিং এবং শটগান সিকোয়েন্সিং এর মধ্যে মূল পার্থক্য তাদের আচরণের পদ্ধতিতে নিহিত। ক্লোন বাই ক্লোন সিকোয়েন্সিং পদ্ধতিতে ক্রোমোজোমের ম্যাপিং এবং সিকোয়েন্সিংয়ের আগে ক্লোনিং জড়িত থাকে যখন শটগান সিকোয়েন্সিং দ্বারা ক্লোন করা হয় সিকোয়েন্সিংয়ের সময় ক্রোমোজোম ম্যাপিং এবং ক্লোনিং উভয় পদক্ষেপই বাদ দেয়।
ক্লোন সিকোয়েন্সিং দ্বারা ক্লোন এবং শটগান সিকোয়েন্সিং দ্বারা ক্লোন আধুনিক দিনের জিনোম সিকোয়েন্সিংয়ের দুটি পদ্ধতি। ক্লোন বাই ক্লোন সিকোয়েন্সিং সিকোয়েন্সিংয়ের আরও নির্ভরযোগ্য পদ্ধতি। যাইহোক, শটগান সিকোয়েন্সিং দ্বারা ক্লোন করার পদ্ধতি দ্রুত এবং সস্তা। নিবন্ধটি ক্লোন দ্বারা ক্লোন সিকোয়েন্সিং এবং শটগান সিকোয়েন্সিংয়ের মধ্যে সূক্ষ্ম পার্থক্যের উপর দৃষ্টি নিবদ্ধ করে।
ক্লোন সিকোয়েন্সিং দ্বারা ক্লোন কি?
ক্লোন বাই ক্লোন সিকোয়েন্সিং হল জিনোম সিকোয়েন্সিং এর একটি পদ্ধতি। এর জন্য ডিএনএ বিভাজনের আগে প্রতিটি ক্রোমোজোমের ম্যাপিং প্রয়োজন। ম্যাপিংয়ের পরে, ডিএনএকে 150 কিলোবেস লম্বা টুকরো টুকরো করে ভেঙে ফেলতে হবে। এই টুকরা তারপর সিকোয়েন্সিং জন্য প্রস্তুত. পরবর্তী ধাপ হল ব্যাকটেরিয়াল কৃত্রিম ক্রোমোজোম (BACs) এবং তারপর ব্যাকটেরিয়া কোষে DNA খণ্ডের সন্নিবেশ। যেহেতু টুকরোগুলো এখন ব্যাকটেরিয়া কোষের অভ্যন্তরে থাকে, প্রতিবার যখন ব্যাকটেরিয়া বিভাজিত হয়, সন্নিবেশিত ডিএনএ খণ্ডগুলোও বিভাজিত হয় এবং অনেকগুলো অভিন্ন কপি তৈরি করে। তারপরে, পৃথক ব্যাকটেরিয়াল ক্লোন ডিএনএ 500 বেস জোড়া লম্বা টুকরোতে খণ্ডিত হয়। এগুলি ছোট এবং ওভারল্যাপিং টুকরো। এরপরে, একটি পরিচিত ডিএনএ সিকোয়েন্স সহ একটি ভেক্টরে এই খণ্ডগুলি সন্নিবেশের সাথে সিকোয়েন্সিং সঞ্চালিত হয়। ভেক্টরের পরিচিত সিকোয়েন্স থেকে শুরু করে, সিকোয়েন্সিং অজানা সিকোয়েন্স পর্যন্ত চলতে থাকে।
সিকোয়েন্সিং শেষ করার পর, ওভারল্যাপিং সিকোয়েন্সের ক্ষেত্রগুলো চিহ্নিত করা প্রয়োজন।তারপরে, টুকরোগুলির সাথে যোগদানের ফলে শুরুতে BAC তে উপস্থাপিত বৃহত্তর খণ্ডগুলি তৈরি হয়। এরপর, জিনোম মানচিত্র অনুযায়ী ক্রোমোজোমে বৃহত্তর খণ্ডের সমাবেশ ঘটে।
চিত্র 01: ক্লোন সিকোয়েন্সিং দ্বারা ক্লোন করুন
ক্লোন সিকোয়েন্সিং দ্বারা ক্লোনের উল্লেখযোগ্য সুবিধা হল যে পূর্ব-প্রস্তুত জিনোম মানচিত্র বৃহত্তর টুকরোগুলির একটি নির্ভরযোগ্য সমাবেশে সহায়তা করে। কিন্তু, এই সিকোয়েন্সিং পদ্ধতির অসুবিধা হল জিনোম মানচিত্র তৈরি করা এবং ক্লোন তৈরি করা সময়সাপেক্ষ। যাইহোক, 'হিউম্যান জিনোম প্রজেক্ট'-এর সময় এটিই পছন্দের পদ্ধতি ছিল।
শটগান সিকোয়েন্সিং দ্বারা ক্লোন কি?
শটগান সিকোয়েন্সিং দ্বারা ক্লোন একটি সিকোয়েন্সিং পদ্ধতি যা এলোমেলোভাবে ডিএনএ সিকোয়েন্সগুলিকে অনেকগুলি ছোট খণ্ডে বিভক্ত করে এবং ওভারল্যাপিং অঞ্চলগুলি পর্যবেক্ষণ করে ক্রমটিকে পুনরায় একত্রিত করে।বৃহত্তর স্তন্যপায়ী জিনোমের ক্রম ক্লোন করা এবং একত্রিত করা কঠিন। এটি তাদের কাঠামোগত জটিলতা এবং আকারের কারণে। যদিও ক্লোন বাই ক্লোন সিকোয়েন্সিং পদ্ধতি নির্ভরযোগ্য, জটিল জীবের জিনোম সিকোয়েন্স করতে দীর্ঘ সময় লাগে। অতএব, শটগান সিকোয়েন্সিং দ্বারা ক্লোন একটি নির্ভরযোগ্য সস্তা সিকোয়েন্সিং পদ্ধতিতে পরিণত হয়েছে যা দ্রুত সম্পাদন করা যেতে পারে। তাই, আধুনিক যুগের বিজ্ঞানীরা জটিল জিনোম মোকাবেলা করার জন্য এই সিকোয়েন্সিং পদ্ধতির উপর নির্ভর করে।
চিত্র 02: শটগান সিকোয়েন্সিং দ্বারা ক্লোন করুন
শটগান সিকোয়েন্সিং পদ্ধতিতে ক্লোন করার সময়, কোন প্রচলিত জিনোম ম্যাপিং এবং ক্লোনিং পদক্ষেপ নেওয়া হয় না। প্রাথমিকভাবে, পুরো জিনোমটি 20 কিলোবেস থেকে 300 কিলোবেস পর্যন্ত বিভিন্ন আকারে খণ্ডিত হয়। এর পরে, সিকোয়েন্সিং সঞ্চালিত হয়।তারপর, অত্যাধুনিক কম্পিউটার সফ্টওয়্যার ব্যবহার করে, ওভারল্যাপ করা অঞ্চলগুলি দেখে টুকরোগুলিকে একত্রিত করা প্রয়োজন৷
শটগান সিকোয়েন্সিং দ্বারা ক্লোন বিদ্যমান জিনোম সিকোয়েন্সের নির্ভুলতা উন্নত করতে সাহায্য করে। এই পদ্ধতির প্রধান সুবিধা হল এটি ক্লোন বাই ক্লোন সিকোয়েন্সিং পদ্ধতির চেয়ে অনেক দ্রুত এবং কম ব্যয়বহুল। যাইহোক, এই প্রক্রিয়াটি একটি জেনেটিক মানচিত্র ব্যবহার করে না। সুতরাং, সমাবেশের সময় ত্রুটিগুলি হওয়ার সম্ভাবনা বেশি। সুতরাং, শটগান সিকোয়েন্সিং পদ্ধতিতে ক্লোনের ক্ষেত্রে এটি একটি বড় অসুবিধা।
ক্লোন সিকোয়েন্সিং এবং শটগান সিকোয়েন্সিং দ্বারা ক্লোনের মধ্যে মিল কী?
- ক্লোন বাই ক্লোন সিকোয়েন্সিং এবং শটগান সিকোয়েন্সিং উভয়ই জিনোম সিকোয়েন্সিং এর দুটি পদ্ধতি।
- উভয় সিকোয়েন্সিং কৌশলের সময়, ভাঙ্গা-ডাউন টুকরোগুলির সমাবেশ ওভারল্যাপ করা অঞ্চলগুলি সনাক্ত করে সঞ্চালিত হয়৷
- এছাড়াও, ক্লোন এবং শটগান সিকোয়েন্সিং উভয়ের জন্যই ডিএনএকে ছোট ছোট টুকরোতে বিভক্ত করা প্রয়োজন৷
ক্লোন সিকোয়েন্সিং এবং শটগান সিকোয়েন্সিং দ্বারা ক্লোনের মধ্যে পার্থক্য কী?
ক্লোন বাই ক্লোন সিকোয়েন্সিং কৌশলে দুটি প্রধান ধাপ জড়িত: ক্রোমোজোমের ম্যাপিং এবং ক্লোনিং। বিপরীতে, শটগান সিকোয়েন্সিং দ্বারা ক্লোন এই দুটি ধাপ অনুসরণ করে না; এটি এলোমেলোভাবে ডিএনএ সিকোয়েন্সকে অনেক ছোট ছোট খণ্ডে বিভক্ত করে এবং ওভারল্যাপিং অঞ্চলগুলি পর্যবেক্ষণ করে ক্রমটিকে পুনরায় একত্রিত করে। সুতরাং, এটি ক্লোন দ্বারা ক্লোন সিকোয়েন্সিং এবং শটগান সিকোয়েন্সিংয়ের মধ্যে মূল পার্থক্য। এই কারণের কারণে, ক্লোন বাই ক্লোন সিকোয়েন্সিং একটি ব্যয়বহুল এবং সময়সাপেক্ষ প্রক্রিয়া যেখানে শটগান সিকোয়েন্সিং দ্বারা ক্লোন দ্রুত এবং সস্তা।
তবে ক্লোন সিকোয়েন্সিং দ্বারা ক্লোন করার সময় সমাবেশের সময় ত্রুটিগুলি হওয়ার সম্ভাবনা কম থাকে। অতএব, এটি উচ্চ নির্ভরযোগ্যতা আছে. যাইহোক, শটগান সিকোয়েন্সিং দ্বারা ক্লোন তুলনামূলকভাবে একটি কম নির্ভরযোগ্য কৌশল। সুতরাং, এটি ক্লোন বাই ক্লোন সিকোয়েন্সিং এবং শটগান সিকোয়েন্সিংয়ের মধ্যে একটি উল্লেখযোগ্য পার্থক্য।
নিচের তথ্য-গ্রাফিক ক্লোন সিকোয়েন্সিং এবং শটগান সিকোয়েন্সিং দ্বারা ক্লোনের মধ্যে পার্থক্য সম্পর্কিত আরও তথ্য উপস্থাপন করে৷
সারাংশ – ক্লোন বাই ক্লোন সিকোয়েন্সিং বনাম শটগান সিকোয়েন্সিং
ক্লোন সিকোয়েন্সিং এবং শটগান সিকোয়েন্সিং দ্বারা ক্লোনের মধ্যে পার্থক্যের সংক্ষিপ্তসারে, ক্লোন বাই ক্লোন সিকোয়েন্সিং এবং শটগান সিকোয়েন্সিং হল জিনোম সিকোয়েন্সিংয়ের দুটি পদ্ধতি। যাইহোক, ক্লোন বাই ক্লোন সিকোয়েন্সিং কৌশলে জিনোম ম্যাপিং এবং ক্লোনিং প্রক্রিয়া উভয়ই জড়িত যেখানে শটগান সিকোয়েন্সিং দ্বারা ক্লোন করা হয় না। সুতরাং, এটি ক্লোন বাই ক্লোন সিকোয়েন্সিং এবং শটগান সিকোয়েন্সিংয়ের মধ্যে মূল পার্থক্য। যেহেতু জিনোম ম্যাপিং ক্লোন সিকোয়েন্সিং দ্বারা ক্লোন করার সময় সঞ্চালিত হয়, তাই সিকোয়েন্সের সমাবেশের সময় ত্রুটি হওয়ার সম্ভাবনা কম থাকে।কিন্তু, শটগান সিকোয়েন্সিং দ্বারা ক্লোন করা অনেক দ্রুত এবং সস্তা প্রক্রিয়া। তবুও, এটি তুলনামূলকভাবে কম নির্ভরযোগ্য। হিউম্যান জিনোম প্রজেক্টের সময় ক্লোন বাই ক্লোন সিকোয়েন্সিং ছিল পছন্দের সিকোয়েন্সিং পদ্ধতি। কিন্তু, আধুনিক দিনের আণবিক জীববিজ্ঞানী শটগান সিকোয়েন্সিং দ্বারা ক্লোনের উপর বেশি নির্ভর করে।
