মূল পার্থক্য - উষ্ণ বনাম ঠান্ডা ট্রাইপসিনাইজেশন
উষ্ণ এবং ঠান্ডা ট্রাইপসিনাইজেশন হল দুটি পদ্ধতি যা প্রাণী কোষের সংস্কৃতিতে কোষের এনজাইমেটিক বিচ্ছিন্নকরণে ব্যবহৃত হয়। উষ্ণ এবং ঠান্ডা ট্রিপসিনাইজেশনের মধ্যে মূল পার্থক্য, যেমন নামগুলি সুপারিশ করে, সেলুলার ডিস্যাগ্রিগেশনের জন্য ট্রিপসিন যোগ করা তাপমাত্রার উপর নির্ভর করে। উষ্ণ ট্রাইপসিনাইজেশন হয় উচ্চ তাপমাত্রার অবস্থার অধীনে (36.5 - 37 0C) যেখানে ঠান্ডা ট্রিপসিনাইজেশন হয় নিম্ন-তাপমাত্রার অবস্থার অধীনে।
প্রাণী কোষের প্রাথমিক কোষ সংস্কৃতির প্রক্রিয়া চলাকালীন, তিনটি প্রধান পদ্ধতি ব্যবহার করা হয়েছে এবং সফল প্রমাণিত হয়েছে।তিনটি পদ্ধতির মধ্যে রয়েছে কোষের যান্ত্রিক বিচ্ছিন্নকরণ, কোষের এনজাইমেটিক বিচ্ছিন্নকরণ এবং প্রাথমিক ব্যাখ্যার কৌশল। কোষের এনজাইমেটিক বিচ্ছিন্নকরণ কোষের বিচ্ছিন্নতার দিকে পরিচালিত করে এবং এটি প্রোটিন-অবক্ষয়কারী এনজাইম ট্রিপসিন দ্বারা সম্পন্ন হয়। অতএব, এই প্রক্রিয়াটি ট্রিপসিনাইজেশন নামে পরিচিত। ট্রাইপসিনাইজেশন দুটি ভিন্ন অবস্থার অধীনে করা যেতে পারে যেমন উষ্ণ ট্রাইপসিনাইজেশন এবং কোল্ড ট্রাইপসিনাইজেশন। উষ্ণ ট্রিপসিনাইজেশন হল 36.5 - 37 0C তাপমাত্রায় উষ্ণ পরিস্থিতিতে ট্রিপসিন দিয়ে কোষের চিকিত্সা করার পদ্ধতি। কোল্ড ট্রিপসিনাইজেশন হল ট্রিপসিনের চিকিত্সার প্রক্রিয়া যা খুব কম তাপমাত্রা বজায় রেখে বরফের মধ্যে বিশেষত ঠান্ডা পরিস্থিতিতে সঞ্চালিত হয়।
উষ্ণ ট্রাইপসিনাইজেশন কি?
Trypsinization একটি প্রাথমিক কোষ সংস্কৃতি তৈরি করার জন্য কোষগুলিকে বিচ্ছিন্ন করার জন্য সেলুলার উপাদানগুলিকে আলাদা করার জন্য করা যেতে পারে। ট্রিপসিন একটি প্রোটিন অবক্ষয়কারী এনজাইম, এবং ট্রিপসিনাইজেশনে ব্যবহৃত এনজাইম মিশ্রণটি হয় একটি অশোধিত নির্যাস বা বিশুদ্ধ পণ্য হতে পারে।অপরিশোধিত নির্যাস প্রোটিন লাইসিস এবং কোষ বিচ্ছিন্নকরণে আরও কার্যকর বলে বলা হয় কারণ এতে অন্যান্য অবক্ষয়কারী এনজাইম রয়েছে।
উষ্ণ ট্রাইপসিনাইজেশন হল কোষ বিচ্ছিন্নকরণের জন্য সবচেয়ে বেশি ব্যবহৃত এনজাইমেটিক পদ্ধতি যা উচ্চ তাপমাত্রার পরিস্থিতিতে ঘটে। ট্রিপসিনাইজেশন দ্বারা চিকিত্সার আগে, পছন্দসই টিস্যু ছোট ছোট টুকরো করে কাটা হয়। এটি সহজে পৃথকীকরণ প্রক্রিয়াকে সহজতর করে। তারপর কাটা টিস্যু একটি বিশেষ মাধ্যমে ধুয়ে ফেলা হয় যা ডিসেকশন বেসাল সল্ট মিডিয়াম নামে পরিচিত।
ওয়াশিং ধাপ শেষ হওয়ার পরে, কোষগুলি সক্রিয় এনজাইম ধারণকারী একটি ফ্লাস্কে রূপান্তরিত হয়, যা ট্রিপসিন। যেহেতু এই কৌশলটি একটি উষ্ণ ট্রিপসিনাইজেশন প্রোটোকল বোঝায়, ট্রিপসিনকে প্রায় 37 0C তাপমাত্রায় প্রায় চার ঘন্টার জন্য স্থাপন করা হয়৷
চিত্র 01: ট্রিপসিন
প্রটোকলের স্বাচ্ছন্দ্যের জন্য এবং পৃথকীকরণ প্রক্রিয়াকে গতিশীল করার জন্য সেন্ট্রিফিউগেশন পদ্ধতি ব্যবহার করে বিষয়বস্তুগুলি মিশ্রিত এবং উত্তেজিত হয়। একবার প্রস্তাবিত সময় অর্জন করা হলে, কোষগুলি সুপারনাট্যান্ট থেকে প্রাপ্ত করা যেতে পারে। সুপারনাট্যান্ট থেকে প্রাপ্ত কোষগুলি তারপর একটি নির্দিষ্ট তাপমাত্রা এবং সময়ে ইনকিউব করা হয়।
কোল্ড ট্রাইপসিনাইজেশন কি?
কোল্ড ট্রিপসিনাইজেশন হল অন্য ধরনের ট্রাইপসিনাইজেশন যা ঠান্ডা অবস্থায় ঘটে। এই কৌশলে, কাটা কোষগুলিকে বরফের শিশিতে রাখা হয় এবং তারপর ট্রিপসিন দিয়ে ভিজিয়ে রাখা হয়। ভিজানোর সময়কাল অনেক বেশি - প্রায় 6 - 24 ঘন্টা৷
ভেজানোর প্রক্রিয়া শেষ হওয়ার পরে, কোষের লাইসেট থেকে ট্রিপসিন অপসারণ করা হয়, এবং টিস্যু টুকরোগুলি আরও 37 0C তাপমাত্রায় প্রায় 20 - 30 মিনিটের জন্য ইনকিউব করা হয়। কোষের বিচ্ছিন্নতা টিস্যু মিশ্রণের বারবার পাইপটিং দ্বারা আনা হয়।এটি কোষগুলিকে ঝিল্লি থেকে বিচ্ছিন্ন হয়ে সুপারনেট্যান্টে আসতে দেবে। একবার কোষগুলি সুপারন্যাট্যান্টে থাকলে, সেগুলি একটি কাঙ্খিত তাপমাত্রা এবং সময়কালে ক্ষয়প্রাপ্ত হয় এবং বৃদ্ধি পায়৷
কোল্ড ট্রিপসিনাইজেশন পদ্ধতির বেশ কিছু সুবিধা রয়েছে
- কোষের ক্ষয়ক্ষতি কম হওয়ায় কার্যকর কোষের উচ্চ ফলন। সেন্ট্রিফিউগেশন স্টেপ ব্যবহার না করে কোষের ক্ষতি কমানো হয়।
- অত্যন্ত সুবিধাজনক পদ্ধতি।
- কম শ্রমসাধ্য।
কোল্ড ট্রিপসিনাইজেশন পদ্ধতির প্রধান সীমাবদ্ধতা হল যে এক দৃষ্টান্তে বেশি পরিমাণে ব্যবহার করা যাবে না।
উষ্ণ এবং ঠান্ডা ট্রাইপসিনাইজেশনের মধ্যে মিল কী?
- উষ্ণ এবং ঠান্ডা ট্রাইপসিনাইজেশন উভয় প্রক্রিয়াই কোষের পৃথকীকরণের জন্য এনজাইম ট্রিপসিন ব্যবহার করে।
- কোষের পৃথকীকরণের জন্য সেল কালচার পদ্ধতিতে উষ্ণ এবং ঠান্ডা ট্রাইপসিনাইজেশন উভয় প্রক্রিয়াই ব্যবহৃত হয়।
- উষ্ণ এবং ঠান্ডা উভয় ধরনের ট্রাইপসিনাইজেশন চিকিত্সা পদ্ধতিতে, কোষগুলি সুপারনাট্যান্ট থেকে উদ্ভূত হয়৷
উষ্ণ এবং ঠান্ডা ট্রাইপসিনাইজেশনের মধ্যে পার্থক্য কী?
উষ্ণ বনাম কোল্ড ট্রাইপসিনাইজেশন |
|
| উষ্ণ ট্রিপসিনাইজেশন হল ট্রিপসিন সহ কোষগুলির চিকিত্সার পদ্ধতি যা 36.5 - 37 তাপমাত্রার তাপমাত্রায় 0।। | কোল্ড ট্রিপসিনাইজেশন হল ট্রিপসিনের চিকিত্সার প্রক্রিয়া যা খুব কম তাপমাত্রা বজায় রেখে বরফের মধ্যে ঠাণ্ডা অবস্থায় সঞ্চালিত হয়। |
| প্রোটোকল | |
| কাটা টিস্যুর টুকরোগুলি পুরো প্রক্রিয়া জুড়ে ক্রমাগত 37 0C বজায় রাখা হয়৷ | কাটা টিস্যুর টুকরো প্রাথমিকভাবে বরফ-ঠান্ডা তাপমাত্রায় রক্ষণাবেক্ষণ করা হয় এবং তারপরে 37 0। |
| তাপমাত্রা | |
| উষ্ণ ট্রিপসিনাইজেশন 36.5 - 37 এ ঘটে 0 | বরফ ঠান্ডা তাপমাত্রায় কোল্ড ট্রিপসিনাইজেশন ঘটে। |
| সময় ব্যয় হয়েছে | |
| উষ্ণ ট্রিপসিনাইজেশনের পুরো প্রক্রিয়ার জন্য কম সময় প্রয়োজন (প্রায় 4 ঘন্টা)। | ঠান্ডা ট্রাইপসিনাইজেশনের জন্য দীর্ঘ সময় প্রয়োজন (প্রায় 6 - 24 ঘন্টা)। |
| কার্যকর কোষের ফলন | |
| উষ্ণ ট্রাইপসিনাইজেশন কম। | ঠান্ডা ট্রাইপসিনাইজেশনে বেশি। |
| সেন্ট্রিফিউগেশনের ব্যবহার | |
| উষ্ণ ট্রিপসিনাইজেশনে কোষের বিচ্ছিন্নকরণের জন্য সেন্ট্রিফিউগেশন প্রয়োজন৷ | কোল্ড ট্রিপসিনাইজেশনে সেন্ট্রিফিউগেশনের প্রয়োজন হয় না। |
| ট্রাইপসিনাইজেশনের জন্য প্রাথমিক টিস্যুর পরিমাণ | |
| উষ্ণ ট্রিপসিনাইজেশনে বেশি পরিমাণে টিস্যু ব্যবহার করা যেতে পারে। | কোল্ড ট্রিপসিনাইজেশনে অল্প পরিমাণে টিস্যু ব্যবহার করা যেতে পারে। |
| কোষের ক্ষতি | |
| উষ্ণ ট্রিপসিনাইজেশনে সেন্ট্রিফিউগেশনের কারণে উচ্চ। | ঠান্ডা ট্রিপসিনাইজেশনের কারণে কম। |
সারাংশ – উষ্ণ বনাম ঠান্ডা ট্রাইপসিনাইজেশন
Trypsinization হল প্রোটিন-অবক্ষয়কারী এনজাইম ট্রিপসিন ব্যবহার করার পদ্ধতি যা কোষের সংস্কৃতির প্রক্রিয়া চলাকালীন প্রাথমিক কোষের সংস্কৃতির পৃথকীকরণ এবং প্রস্তুতির জন্য। প্রক্রিয়া চলাকালীন ব্যবহৃত তাপমাত্রার উপর ভিত্তি করে ট্রিপসিনাইজেশনের দুটি প্রধান কৌশল রয়েছে। তারা উষ্ণ এবং ঠান্ডা trypsinization হয়। উষ্ণ ট্রিপসিনাইজেশন 37 0C তাপমাত্রায় সঞ্চালিত হয় যেখানে ঠান্ডা ট্রিপসিনাইজেশন বরফ-ঠান্ডা অবস্থায় করা হয়।যদিও ঠান্ডা ট্রিপসিনাইজেশন সম্পূর্ণ হতে বেশি সময় নেয়, তবে এটি কার্যকর কোষের উচ্চ ফলন বলে বলা হয়। এটি এই কারণে যে কোল্ড ট্রিপসিনাইজেশনে কোষের ক্ষতি হ্রাস করা হয় কারণ এটি শক্তিশালী সেন্ট্রিফিউগেশন পদক্ষেপগুলি ব্যবহার করে না। এটি উষ্ণ এবং ঠান্ডা ট্রিপসিনাইজেশনের মধ্যে পার্থক্য।
